【摘要】：文蛤(Meretrix meretrix)的養(yǎng)殖歷史已有千年之久,其經(jīng)濟價值高、營養(yǎng)豐富、肉質(zhì)鮮美,是我國重要的海產(chǎn)經(jīng)濟貝類之一。近年來由于文蛤自然苗種被大量采捕,異地移養(yǎng),人為加大了具有不同遺傳背景的文蛤群體間的基因交流,對我國文蛤種質(zhì)資源保護產(chǎn)生了較大的負面影響,因此,本文采用三種分子生物學(xué)方法對6個不同海域文蛤地理群體的親緣關(guān)系進行分析。另外,對江蘇2種殼色文蛤及紅殼色選育子代的主要鮮味物質(zhì)進行定量檢測,為文蛤良種選育提供參考。為探究中國遼東半島海域(遼寧群體)、長江口及其兩翼海域(江蘇群體)、臺灣海峽西部海域(福建群體)、珠江口及其兩翼海域(廣東群體)、北部灣海域(廣西群體)以及日本伊勢灣海域(三重群體)6個不同海域文蛤地理群體的親緣關(guān)系,采用18S rRNA基因、線粒體細胞色素氧化酶c亞基I(COI)及16S rRNA基因3種分子標(biāo)記進行序列測定與分析。測序結(jié)果顯示,3種基因序列長度分別在1854、658、596 bp左右;18S rRNA基因堿基組成無偏異,序列較為保守;COI與16S rRNA基因A+T平均含量明顯大于G+C含量,符合線粒體基因組成特征。通過MegAlign軟件比對6個地理群體文蛤,序列相似百分比分別為99.7%~100.0%(18S)、91.7%~99.8%(COI)、90.2%~99.8%(16S),其中三重文蛤序列差異最大;以文蛤?qū)俚暮熚母?Meretrix lyrata)作外群,采用MEGA 5.03軟件中相鄰連接法(NJ)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹顯示,我國沿海5個文蛤群體聚為一枝且與日本三重文蛤分開,自展值分別為67%(18S)、99%(COI)、98%(16S);我國沿海5個文蛤群體中,遼寧、江蘇、福建文蛤首先聚在一起,其次是廣西文蛤,最后是廣東文蛤。研究結(jié)果表明,遼寧、江蘇、福建文蛤同源性較高,親緣關(guān)系最近;廣西文蛤、廣東文蛤與我國其它文蛤群體間遺傳差異較大,地理遺傳分化明顯;而日本三重文蛤與我國沿海文蛤可定為文蛤的2個地理亞種。以江蘇文蛤為研究對象,采集紅殼色文蛤原種、黃殼色文蛤原種、紅殼色文蛤選育F1、紅殼色文蛤選育F2 4個群體,檢測其主要非揮發(fā)性鮮味物質(zhì)成分單磷酸腺苷(AMP)、單磷酸鳥苷(GMP)、次黃嘌呤核苷酸(IMP)、琥珀酸、游離氨基酸、無機離子(Na+、K+、Cl-、PO43-)的含量,并通過味道強度值(TAV)評價其呈味作用。鑒于核苷酸與氨基酸在呈味方面的協(xié)同效應(yīng),采用味精當(dāng)量(EUC)評價不同文蛤群體的鮮味品質(zhì)。結(jié)果表明,文蛤軟體組織中AMP、琥珀酸、谷氨酸、精氨酸、丙氨酸、Na+、K+、Cl-的TAV值大于1,是文蛤鮮味的主要貢獻者;紅殼色文蛤原種的鮮味強度最大(4.92 g·100g-1),其子代紅殼色文蛤F1(4.08 g·100g-1)、紅殼色文蛤F2(4.09 g·100g-1)稍有降低,但仍顯著高于黃殼色文蛤原種(3.34 g·100g-1)(P0.05),表明江蘇紅殼色文蛤在鮮味品質(zhì)方面具有相對穩(wěn)定的較高品質(zhì)。文章為文蛤良種選育及文蛤在調(diào)味產(chǎn)品開發(fā)方面的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。
【圖文】：

圖 2-1 樣本采集地理分布圖 （▲代表采樣地點）Fig.2-1 Geographic distribution of sampling sites (▲shows a sampling site)2.1.2 儀器設(shè)備超純水系統(tǒng)：美國 milipore，ELIX-5Academic低溫冰箱：海爾集團電熱式壓力蒸汽滅菌器：浙江新豐醫(yī)療器械有限公司，XFS-30CA微量移液器：德國 Eppendorf公司水浴鍋：上�；厶﹥x器制造有限公司高速冷凍離心機：德國艾本德股份公司PCR 儀：德國艾本德股份公司，Eppendorf Mastercycler恒壓恒流電泳儀：上海富眾生物科學(xué)有限公司，Bio-Rad HV 164-5056水平電泳槽：六一儀器廠，DYY_III凝膠成像系統(tǒng)：美國 Bio-Rad 公司， Gel Doc XR+

圖 2-2 DNA 電泳圖Fig.2-2 Electrophoretogram of DNA.2.2 PCR 擴增結(jié)果提取 6個地理群體文蛤的總 DNA后，使用不同引物進行 PCR 擴增分別得到8S rRNA 基因片段一、18S rRNA 基因片段二、18S rRNA 基因片段三、COI 基6S rRNA 基因，純化后進行濃度為 1%的瓊脂糖凝膠電泳，效果如圖 2-3、2-4、-5 所示：
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4

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本文編號：2643054