【摘要】：本研究選用中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所培育的"壬海1號(hào)"凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)新品種,利用單因子濃度梯度法,通過(guò)在基礎(chǔ)飼料中添加不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的聚β-羥基丁酸醋(poly-β-hydroxybutyrate,PHB)比較對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性狀、相關(guān)的非特異性免疫基因的影響,以期獲得PHB在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的理論支持。具體研究結(jié)果如下:1.選取同一家系生長(zhǎng)狀況良好的360尾大小均勻、體型正常的凡納濱對(duì)蝦仔蝦,分為6組,每組3重復(fù)。實(shí)驗(yàn)對(duì)蝦分別用含0.0%(即不含PHB的空白對(duì)照組)、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%、10.0%PHB的飼料投喂凡納濱對(duì)蝦6周,實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)計(jì)算其存活率,增長(zhǎng)率,非特異性免疫酶活力等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PHB對(duì)對(duì)蝦存活率無(wú)影響(P0.05);在PHB濃度不高于2.5%時(shí),PHB能提高對(duì)蝦的體重增長(zhǎng)率等,但在5.0%和10.0%PHB濃度組中其生長(zhǎng)性能反而受到抑制。對(duì)對(duì)蝦體內(nèi)不同組織中免疫酶活進(jìn)行測(cè)定,發(fā)現(xiàn)在PHB濃度為1.0%-2.5%時(shí)對(duì)蝦的免疫酶活性上升。以上結(jié)果表明,1.0%-2.5%PHB濃度為最適濃度,該濃度范圍內(nèi)顯著促進(jìn)L.vannamei的體重增長(zhǎng)及非特異性免疫酶活力。2.利用生長(zhǎng)測(cè)試實(shí)驗(yàn)材料,選取0.0%及2.5%PHB濃度組,對(duì)其進(jìn)行氛氮脅迫實(shí)驗(yàn)。在養(yǎng)殖水體中加入氯化銨(NH4Cl),使水體中氨氮終濃度為15mg/L。實(shí)驗(yàn)中取0、3、6、12、24、48 h的凡納濱對(duì)蝦,測(cè)定其鰓絲、肝胰腺、肌肉及血淋巴中免疫因子的基因表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,飼喂2.5%PHB的對(duì)蝦體內(nèi)丙二醛(Malonaldehyde,MDA)含量均低于空白對(duì)照組,且免疫基因表達(dá)量高于不含PHB的對(duì)照組。相對(duì)于對(duì)照組,投喂2.5%PHB的對(duì)蝦體內(nèi)免疫基因表達(dá)量均高于對(duì)照組。在氨氮脅迫后,血淋巴中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)及過(guò)氧化物酶(peroxidase,CAT)基因表達(dá)比值呈現(xiàn)先上升后下降再上調(diào)的趨勢(shì),到48h表達(dá)量是對(duì)照組的3.81倍和1.56倍(P0.05)。相對(duì)于血淋巴,肝胰腺及鰓中sod和cat活力則呈現(xiàn)略微下降后上升,表達(dá)水平與Oh無(wú)顯著差異(P0.05)。而谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathion peroxidase,Gsh-px)、溶菌酶(lysozyme,LZM)基因表達(dá)在肝胰腺中均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)仍是對(duì)照組的2.24倍和2.36倍。而在血淋巴及鰓中g(shù)sh-px和lzm比值在脅迫后略微下降后上升再下降。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,P HB對(duì)氨氮脅迫下的凡納濱對(duì)蝦具有一定的保護(hù)作用。3.選取同一家系平均體重為3.95-4.52 g的同一家系的凡納濱對(duì)蝦分為6組,分別用含 0.0%((即不含 PHB 的空白對(duì)照組)、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%、10.0%PHB的飼料投喂投喂,4周后通過(guò)肌肉注射鰻孤菌懸液方式使其感染鰻孤菌,每組6重復(fù)(30尾/重復(fù)):3重復(fù)用于統(tǒng)計(jì)感染鰻弧菌后對(duì)蝦死亡率,3組用于取樣。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后統(tǒng)計(jì)各組對(duì)蝦存活率并選擇免疫保護(hù)率(RPS)最高組,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)測(cè)定感染鰻弧菌后48 h內(nèi)免疫基因表達(dá)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦的存活率隨PHB濃度升高呈現(xiàn)先上升后下降再上升的趨勢(shì),飼喂PHB的實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦平均存活時(shí)間均高于未飼喂PHB的實(shí)驗(yàn)組;且飼料中含有1.0%PHB對(duì)對(duì)蝦的免疫保護(hù)率最高。對(duì)比1.0%PHB及空白組血淋巴免疫基因表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)1.0%PHB組對(duì)蝦體內(nèi)免疫基因表達(dá)水平高于空白對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,PHB能增強(qiáng)凡納濱對(duì)蝦抵抗鰻孤菌感染的能力。4.選取同一家系平均體重為3.95-4.52 g的凡納濱對(duì)蝦分為6組,每組6重復(fù):3重復(fù)用于統(tǒng)計(jì)感染白斑綜合癥病毒(whitespotsyndromevirus,WSSV)后對(duì)蝦死亡率,3組用于取樣。以含不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)(0.0%,0.5%,1.0%,2.5%,5.0%,10.0%)PHB的人工配合飼料飼喂凡納濱對(duì)蝦20天后,經(jīng)人工注射的方式使對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV;利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析PHB對(duì)凡納濱對(duì)蝦抵御WSSV侵染能力的影響,并選擇最高免疫保護(hù)率(RPS)組進(jìn)行不同時(shí)間點(diǎn)基因表達(dá)量分析。研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)PHB飼喂的對(duì)蝦在感染W(wǎng)SSV后與未飼喂PHB的對(duì)蝦存活率無(wú)顯著影響(P0.05);但感染W(wǎng)SSV的對(duì)蝦平均存活時(shí)間隨PHB濃度上升呈現(xiàn)先上升后下降再上升的趨勢(shì),飼喂PHB對(duì)蝦的平均存活時(shí)間均高于對(duì)照組,其中1.0%PHB濃度組對(duì)蝦平均存活時(shí)間最長(zhǎng),且顯著高于空白對(duì)照組及5.0%PHB實(shí)驗(yàn)組(P0.05)。分析各組對(duì)蝦體內(nèi)病毒含量,發(fā)現(xiàn)1.0%PHB濃度組對(duì)蝦病毒含量在實(shí)驗(yàn)前期顯著低于對(duì)照組(尸0.05)。對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV后,對(duì)對(duì)照組及1.0%PHB實(shí)驗(yàn)組對(duì)蝦前48 h內(nèi)6個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)的sod、cat、gsh-px、lzm及abp5個(gè)基因進(jìn)行表達(dá)趨勢(shì)分析,結(jié)果表明投喂PHB的對(duì)蝦在感染W(wǎng)SSV后血淋巴中sod、cat、gsh-px和lzm表達(dá)量呈現(xiàn)上升后下降再上升趨勢(shì)且分別在6 h,6 h,3 h,6 h達(dá)到最大值;abp在WSSV感染3 h內(nèi)急速下降,隨后在12 h達(dá)到最大值后又下降;另外飼喂PHB對(duì)蝦體內(nèi)免疫基因表達(dá)量均高于對(duì)照組。結(jié)果說(shuō)明,PHB能夠提高凡納濱對(duì)蝦對(duì)WSSV的抵抗力,且在一定程度上提高了對(duì)蝦的免疫力。本研究主要研究聚β-羥基丁酸酯對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖物種凡納濱對(duì)蝦的影響,探究PHB對(duì)其生長(zhǎng)及抗病能力的影響,旨在開(kāi)發(fā)一種新的免疫增強(qiáng)劑,同時(shí)擴(kuò)展PHB在水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)的應(yīng)用。
【圖文】：

免疫系統(tǒng)涉及的反應(yīng)物質(zhì)種類(lèi)繁多，反應(yīng)過(guò)程復(fù)雜，對(duì)于免疫因子之間相互作逡逑用方式等問(wèn)題研究缺乏全面性，馬寨X實(shí)榷匝芯苛思卓嵌錈庖呦低持懈魑鎦實(shí)膩義獻(xiàn)饔霉叵擋⑻峁┝絲蚣芑。ㄍ跡保玻�。逦逦辶x希繡澹保刪蹘逡逑ＬＰＳ邋ＰＧ逡逑化蛋白ＳＤＳ逡逑１１３邐「，而邐呵焌下格－Ｉ逡逑Ｅ５Ｈ１＊＇邐—＊邐．逡逑■：邐１邐－邋ｉ邐ＩuQＩ邋ｒｉ￣｜邋－—叫＇邋ｒｏ邋Ｉ邋｜化扣豪白Ｉ邐｜ｇ－芭培蛋白Ｉ逡逑是合中革巧取加利Ｉ邋；邐Ｉ邋＊Ｊ邋０Ｎ？）邋ｉ……黑色索Ｉ＿Ｊ甫掘—ｉ＿［系墫Qi逡逑化鳴處么去邐－｜邐Ｉ邐＾＾邐？邐＇邐．一逡逑—Ｉ邐—？雨提親－邐，邐１邐邐——￣—逡逑￣＂（Ｍｓ－邐勵(lì)邐－：：邐Ｉ邋ｔ邋Ｈ邋\鑾懾危荊義希懾澹停肭繕杞印�，逦ｎ傚ｎ——化� ＇尚R[逡逑Ｉ巧eW苗多j#Ｉ邋Ｉ免趣多d冢桑體義希危у危澹鏡可璐苶插五義希掊吻衤憂掌媲暈炕ィ浴葢|傘義希埃保常鞒慫唬懷傻鞍祝懾�，邋ＯX�，，逦＾�,巧吝巧Ｈ裝雜！逡逑踩奈古邐Ｉ巧ｋｉ）蛋白Ｉ邋ｉ有機(jī)巧凍物Ｌ邐＾逡逑ｋｒ＞蛋白逡逑Ｉｅｌ邐逡逑苗邐—邐邐邋邐邋森

本文編號(hào)：2631220