【摘要】：本研究選用中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所培育的"壬海1號"凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)新品種,利用單因子濃度梯度法,通過在基礎飼料中添加不同質量分數(shù)的聚β-羥基丁酸醋(poly-β-hydroxybutyrate,PHB)比較對凡納濱對蝦生長性狀、相關的非特異性免疫基因的影響,以期獲得PHB在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的理論支持。具體研究結果如下:1.選取同一家系生長狀況良好的360尾大小均勻、體型正常的凡納濱對蝦仔蝦,分為6組,每組3重復。實驗對蝦分別用含0.0%(即不含PHB的空白對照組)、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%、10.0%PHB的飼料投喂凡納濱對蝦6周,實驗結束時計算其存活率,增長率,非特異性免疫酶活力等。實驗結果顯示PHB對對蝦存活率無影響(P0.05);在PHB濃度不高于2.5%時,PHB能提高對蝦的體重增長率等,但在5.0%和10.0%PHB濃度組中其生長性能反而受到抑制。對對蝦體內(nèi)不同組織中免疫酶活進行測定,發(fā)現(xiàn)在PHB濃度為1.0%-2.5%時對蝦的免疫酶活性上升。以上結果表明,1.0%-2.5%PHB濃度為最適濃度,該濃度范圍內(nèi)顯著促進L.vannamei的體重增長及非特異性免疫酶活力。2.利用生長測試實驗材料,選取0.0%及2.5%PHB濃度組,對其進行氛氮脅迫實驗。在養(yǎng)殖水體中加入氯化銨(NH4Cl),使水體中氨氮終濃度為15mg/L。實驗中取0、3、6、12、24、48 h的凡納濱對蝦,測定其鰓絲、肝胰腺、肌肉及血淋巴中免疫因子的基因表達量。實驗結果顯示,飼喂2.5%PHB的對蝦體內(nèi)丙二醛(Malonaldehyde,MDA)含量均低于空白對照組,且免疫基因表達量高于不含PHB的對照組。相對于對照組,投喂2.5%PHB的對蝦體內(nèi)免疫基因表達量均高于對照組。在氨氮脅迫后,血淋巴中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)及過氧化物酶(peroxidase,CAT)基因表達比值呈現(xiàn)先上升后下降再上調的趨勢,到48h表達量是對照組的3.81倍和1.56倍(P0.05)。相對于血淋巴,肝胰腺及鰓中sod和cat活力則呈現(xiàn)略微下降后上升,表達水平與Oh無顯著差異(P0.05)。而谷胱甘肽過氧化物酶(glutathion peroxidase,Gsh-px)、溶菌酶(lysozyme,LZM)基因表達在肝胰腺中均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,至實驗結束時仍是對照組的2.24倍和2.36倍。而在血淋巴及鰓中gsh-px和lzm比值在脅迫后略微下降后上升再下降。實驗結果表明,P HB對氨氮脅迫下的凡納濱對蝦具有一定的保護作用。3.選取同一家系平均體重為3.95-4.52 g的同一家系的凡納濱對蝦分為6組,分別用含 0.0%((即不含 PHB 的空白對照組)、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%、10.0%PHB的飼料投喂投喂,4周后通過肌肉注射鰻孤菌懸液方式使其感染鰻孤菌,每組6重復(30尾/重復):3重復用于統(tǒng)計感染鰻弧菌后對蝦死亡率,3組用于取樣。實驗結束后統(tǒng)計各組對蝦存活率并選擇免疫保護率(RPS)最高組,利用實時熒光定量PCR技術測定感染鰻弧菌后48 h內(nèi)免疫基因表達量。結果發(fā)現(xiàn)對蝦的存活率隨PHB濃度升高呈現(xiàn)先上升后下降再上升的趨勢,飼喂PHB的實驗組對蝦平均存活時間均高于未飼喂PHB的實驗組;且飼料中含有1.0%PHB對對蝦的免疫保護率最高。對比1.0%PHB及空白組血淋巴免疫基因表達水平,發(fā)現(xiàn)1.0%PHB組對蝦體內(nèi)免疫基因表達水平高于空白對照組。實驗結果說明,PHB能增強凡納濱對蝦抵抗鰻孤菌感染的能力。4.選取同一家系平均體重為3.95-4.52 g的凡納濱對蝦分為6組,每組6重復:3重復用于統(tǒng)計感染白斑綜合癥病毒(whitespotsyndromevirus,WSSV)后對蝦死亡率,3組用于取樣。以含不同質量分數(shù)(0.0%,0.5%,1.0%,2.5%,5.0%,10.0%)PHB的人工配合飼料飼喂凡納濱對蝦20天后,經(jīng)人工注射的方式使對蝦感染W(wǎng)SSV;利用實時熒光定量PCR技術分析PHB對凡納濱對蝦抵御WSSV侵染能力的影響,并選擇最高免疫保護率(RPS)組進行不同時間點基因表達量分析。研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)PHB飼喂的對蝦在感染W(wǎng)SSV后與未飼喂PHB的對蝦存活率無顯著影響(P0.05);但感染W(wǎng)SSV的對蝦平均存活時間隨PHB濃度上升呈現(xiàn)先上升后下降再上升的趨勢,飼喂PHB對蝦的平均存活時間均高于對照組,其中1.0%PHB濃度組對蝦平均存活時間最長,且顯著高于空白對照組及5.0%PHB實驗組(P0.05)。分析各組對蝦體內(nèi)病毒含量,發(fā)現(xiàn)1.0%PHB濃度組對蝦病毒含量在實驗前期顯著低于對照組(尸0.05)。對蝦感染W(wǎng)SSV后,對對照組及1.0%PHB實驗組對蝦前48 h內(nèi)6個采樣時間點的sod、cat、gsh-px、lzm及abp5個基因進行表達趨勢分析,結果表明投喂PHB的對蝦在感染W(wǎng)SSV后血淋巴中sod、cat、gsh-px和lzm表達量呈現(xiàn)上升后下降再上升趨勢且分別在6 h,6 h,3 h,6 h達到最大值;abp在WSSV感染3 h內(nèi)急速下降,隨后在12 h達到最大值后又下降;另外飼喂PHB對蝦體內(nèi)免疫基因表達量均高于對照組。結果說明,PHB能夠提高凡納濱對蝦對WSSV的抵抗力,且在一定程度上提高了對蝦的免疫力。本研究主要研究聚β-羥基丁酸酯對水產(chǎn)養(yǎng)殖物種凡納濱對蝦的影響,探究PHB對其生長及抗病能力的影響,旨在開發(fā)一種新的免疫增強劑,同時擴展PHB在水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)的應用。
【圖文】：

免疫系統(tǒng)涉及的反應物質種類繁多，反應過程復雜，對于免疫因子之間相互作逡逑用方式等問題研究缺乏全面性，馬寨X實榷匝芯苛思卓嵌錈庖呦低持懈魑鎦實膩義獻饔霉叵擋⑻峁┝絲蚣芑。ㄍ跡保玻�。逦逦辶x希繡澹保刪蹘逡逑ＬＰＳ邋ＰＧ逡逑化蛋白ＳＤＳ逡逑１１３邐「，而邐呵焌下格－Ｉ逡逑Ｅ５Ｈ１＊＇邐—＊邐．逡逑■：邐１邐－邋ｉ邐ＩuQＩ邋ｒｉ￣｜邋－—叫＇邋ｒｏ邋Ｉ邋｜化扣豪白Ｉ邐｜ｇ－芭培蛋白Ｉ逡逑是合中革巧取加利Ｉ邋；邐Ｉ邋＊Ｊ邋０Ｎ？）邋ｉ……黑色索Ｉ＿Ｊ甫掘—ｉ＿［系墫Qi逡逑化鳴處么去邐－｜邐Ｉ邐＾＾邐？邐＇邐．一逡逑—Ｉ邐—？雨提親－邐，邐１邐邐——￣—逡逑￣＂（Ｍｓ－邐勵邐－：：邐Ｉ邋ｔ邋Ｈ邋\鑾懾危荊義希懾澹停肭繕杞印危睿媯澹睢瘡 ＇尚R[逡逑Ｉ巧eW苗多j#Ｉ邋Ｉ免趣多d冢桑體義希危у危澹鏡可璐苶插五義希掊吻衤憂掌媲暈炕ィ浴葢|傘義希埃保常鞒慫唬懷傻鞍祝懾�，邋ＯX澹�，逦＾�,巧吝巧Ｈ裝雜！逡逑踩奈古邐Ｉ巧ｋｉ）蛋白Ｉ邋ｉ有機巧凍物Ｌ邐＾逡逑ｋｒ＞蛋白逡逑Ｉｅｌ邐逡逑苗邐—邐邐邋邐邋森

本文編號：2631220