【摘要】：溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是感染海洋生物的弧菌類主要病原菌,在世界范圍內(nèi)分布廣泛,對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。群體感應(yīng)系統(tǒng)對溶藻弧菌的毒力具有重要調(diào)控作用,可替換σ因子σE可以調(diào)控溶藻弧菌的群體感應(yīng)系統(tǒng)中樞元件LuxR的表達(dá),對群體感應(yīng)系統(tǒng)起著關(guān)鍵的調(diào)控作用。前期的實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),σE是溶藻弧菌中一種響應(yīng)溫度調(diào)控的σ因子。另外,RNA-Seq研究表明溶藻弧菌rpoE缺失的情況下,編碼一種可能的可替換sigma因子基因的表達(dá)水平顯著下降。本課題把這個未被鑒定過的可替換sigma因子命名為6x,其編碼基因命名為rpoXo溶藻弧菌中rpoX基因與費氏弧菌(Vibrio fischeri) ES114的rpoS類σ因子rpoQ具有43%的同源性。因此,本課題進(jìn)一步對rpoX進(jìn)行研究,考察rpoX對溶藻弧菌毒力的調(diào)控作用和環(huán)境應(yīng)激適應(yīng)過程中的功能,并對rpoX的調(diào)控元做進(jìn)一步分析。本文從轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平上驗證了σE對rpoX的表達(dá)具有調(diào)控作用,且σE正調(diào)控rpoX的表達(dá)。EMSA實驗證實σE對rpoX具有直接調(diào)控作用。由于rpoE的表達(dá)受到溫度調(diào)控作用,因此我們也考察rpoX受溫度的調(diào)控作用。結(jié)果表明rpoX在菌體受到熱應(yīng)激時(如42℃)表達(dá)量顯著上升。本實驗還表明rpoX在低鹽(0.5%NaCl)條件下表達(dá)受到嚴(yán)格調(diào)控。rpoX對溶藻弧菌的運動能力和生物被膜的形成均有激活作用,但rpoX對該菌感染斑馬魚的能力沒有顯著影響。實驗結(jié)果還表明LuxR和LuxO對rpoX不存在調(diào)控作用,說明群體感應(yīng)系統(tǒng)對rpoX不存在直接調(diào)控作用。本課題進(jìn)一步通過RNA-Seq和ChIP-Seq方法對σx調(diào)控元進(jìn)行鑒定和分析。RNA-Seq結(jié)果表明溶藻弧菌中有1043個基因受σx的調(diào)控作用。其中,有149個基因受6x激活作用,有894個基因受σx抑制作用。受6x調(diào)控的基因主要有壓力應(yīng)激響應(yīng)相關(guān)基因,鞭毛合成和調(diào)控相關(guān)基因,膜蛋白相關(guān)基因,毒力因子和相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子等。ChIP-Seq實驗結(jié)果表明σx對自身編碼基因rpoX存在調(diào)控作用。本文采用EMSA實驗進(jìn)一步證實了這一結(jié)論�？傊�,本課題首次對σx進(jìn)行了較為系統(tǒng)的功能鑒定和分析,為深入理解溶藻弧菌和其他弧菌中的基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)提供了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：華東理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S941.4

【參考文獻(xiàn)】

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1 ;Expression,Characterization and Immunogenicity of a Major Outer Membrane Protein from Vibrio alginolyticus[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;2007年03期

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本文編號：2621889