【摘要】：馬氏珠母貝(Pinctada martensii)是我國(guó)人工海水育珠的主要珍珠貝之一,近年來(lái)因沿海水質(zhì)的日趨惡化,各種病害也頻繁發(fā)生,導(dǎo)致馬氏珠母貝因病害發(fā)生大量死亡,對(duì)我國(guó)珍珠產(chǎn)業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此,了解馬氏珠母貝免疫機(jī)制并在此基礎(chǔ)上提高馬氏珠母貝抗脅迫能力是目前亟需解決的問(wèn)題�？咕氖秦愵惿锩庖邫C(jī)制中最重要的一個(gè)環(huán)節(jié),但目前對(duì)馬氏珠母貝抗菌肽的報(bào)道甚少。本實(shí)驗(yàn)采用多步高效液相色譜結(jié)合質(zhì)譜分析,對(duì)馬氏珠母貝血清中具有抑菌活性的蛋白質(zhì)開展了分離純化及鑒定研究,從中獲得三種具有抑菌活性的蛋白質(zhì)成分,分別將這三種抗菌活性蛋白命名為PmECSOD(馬氏珠母貝超氧化物歧化酶,P.martensii extracellular superoxide dismutase),PmC LEC-1(馬氏珠母貝C-型凝集素,P.martensii c-type lectin),PmAMP-1(馬氏珠母貝抗菌肽,P.martensii antimicrobial peptide-1)。為了進(jìn)一步了解這三種活性蛋白的基因組成,通過(guò)在馬氏珠母貝的基因組和NCBI提供的珠母貝數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索同源核酸序列并以之為模板設(shè)計(jì)引物,運(yùn)用cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)技術(shù),成功克隆得到這三種蛋白質(zhì)的cDNA全序列,運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)一步研究了三者的組織特異性分布以及細(xì)菌誘導(dǎo)后基因豐度變化情況。結(jié)果如下:1、馬氏珠母貝超氧化物歧化酶(PmECSOD)基因cDNA全長(zhǎng)序列為1864 bp,開放閱讀框(ORF)為1422 bp,編碼473個(gè)氨基酸,N-末端有信號(hào)肽,有20個(gè)氨基酸,成熟肽有453個(gè)氨基酸。氨基酸序列分析顯示,PmCESOD的氨基酸序列具有典型的SOD結(jié)構(gòu)域,在它的N端還有FRI和IGc2兩個(gè)結(jié)構(gòu)域。同源性分析顯示PmECSOD與其它兩種貝類的ECSOD相似性很低,與海灣扇貝太平洋長(zhǎng)牡蠣的相似度是分別是36.42%和28.32%。熒光定量分析發(fā)現(xiàn),該基因在閉殼肌、外套膜、肝胰腺、鰓、性腺以及血淋巴六個(gè)組織中均有表達(dá),在鰓中的表達(dá)量最高,在閉殼肌中的表達(dá)量最低。經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)刺激之后,48h在血淋巴中表達(dá)含量達(dá)到最高,具有顯著性差異。2、馬氏珠母貝C-型凝集素(PmCLEC-1)基因cDNA全長(zhǎng)序列為636 bp,開放閱讀框(ORF)為450 bp,編碼149個(gè)氨基酸,其中有19個(gè)信號(hào)肽,成熟肽為130個(gè)氨基酸,具有C-型凝集素典型的結(jié)構(gòu)域——糖結(jié)合識(shí)別位點(diǎn)(CDR)。與馬氏珠母貝其他兩種的C-型凝集素PoLEC-1和PoLEC-2對(duì)比,發(fā)現(xiàn)與兩者的相似度很低�？臻g結(jié)構(gòu)顯示PmCLEC-1除了有緊湊結(jié)構(gòu),在N端還有兩個(gè)Cys。熒光定量分析發(fā)現(xiàn),在外套膜和肝胰腺的含量最高,而血淋巴中的含量最低。細(xì)菌誘導(dǎo)之后,12h在血淋巴中的表達(dá)含量最高。3、馬氏珠母貝抗菌肽(PmAMP-1)基因cDNA全長(zhǎng)為700bp,其中開放閱讀框?yàn)?06bp,編碼了101個(gè)AA。空間結(jié)構(gòu)顯示PmAMP-1為α-螺旋結(jié)構(gòu)。通過(guò)電鏡進(jìn)一步觀察了PmAMP-1對(duì)細(xì)菌的作用機(jī)制。熒光定量分析發(fā)現(xiàn),在閉殼肌中表達(dá)含量最高,血淋巴中含量最低;經(jīng)細(xì)菌刺激之后,8h在血淋巴中表達(dá)量最高。本實(shí)驗(yàn)首次從馬氏珠母貝血清中獲得三種具有抗菌活性的蛋白質(zhì)成分,為了解馬氏珠母貝體液免疫相關(guān)因子鑒定了基礎(chǔ),對(duì)研究馬氏珠母貝的免疫機(jī)制蛋白具有重要意義。
【學(xué)位授予單位】：廣東海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號(hào)：2621507