植物microRNAs(miRNAs)是一類長度為20-24 nt的非編碼小RNA,通過抑制mRNA的翻譯或者降解mRNA來調(diào)控靶基因的表達(dá)。miR408是由21個核苷酸組成的高度保守的miRNA分子,在多個物種中已有報道。研究表明,miR408在植物體內(nèi)可參與非生物脅迫應(yīng)答、維持銅離子平衡,miR408過表達(dá)的擬南芥幼苗其花青素含量是對照的7-8倍,說明miR408可能參與植物的次生代謝調(diào)控。丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge),唇形科多年生藥用植物,其根是我國傳統(tǒng)大宗藥材,對心腦血管疾病、組織損傷、血脂升高等具有很好療效,被譽(yù)為“藥用模式植物”。目前關(guān)于丹參中miRNA的功能研究尚未見報道。本實(shí)驗(yàn)從丹參中克隆得到miR408前體序列,進(jìn)一步獲得該基因的過表達(dá)轉(zhuǎn)基因煙草及干涉轉(zhuǎn)基因丹參株系,以期對調(diào)控丹參次生代謝產(chǎn)物的生物學(xué)功能進(jìn)行初步研究。本實(shí)驗(yàn)的研究內(nèi)容與結(jié)果如下:1.基于丹參基因組Survey數(shù)據(jù)庫,從中搜索并通過PCR克隆得到長度為366 bp的miR408前體序列及長度為723 bp的上游啟動子區(qū),并將miR408的前體序列命名為Sm-MIR408。通過...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２?洲前體二級結(jié)構(gòu)預(yù)測??

能為－７５．００?ｋｃａｌ／ｍｏｌ，故能開多成穩(wěn)定的莖環(huán)結(jié)構(gòu)，ｍｉＲ４０８／ｍｉＲ４０８＊雙鏈結(jié)構(gòu)區(qū)分別??位于莖環(huán)結(jié)構(gòu)的兩臂，ｍｉＲ４０８成熟序列（５＇－ＡＵＧＣＡＣＵＧＣＣＵＣＵＵＣＣＣＵＧＧＣ－３＇）??位在于莖環(huán)結(jié)構(gòu)３’端（圖２－２箭頭所指位置）。??在�。遥危翑�(shù)據(jù)庫ｍｉ....

圖2-3miR408成熟序列堿基保守性分析

ｍｉＲ４０８的前體序列及成熟序列，分析丹參ｍｉＲ４０８和數(shù)據(jù)庫中所有植物??４０８成熟序列堿基保守性，結(jié)果如圖２－３所示，ｍｉＲ４０８家族具有很高的保守性，??９，?１３，１５，１６，?１９位上的堿基保守性最高，且丹參ｍｉＲ４０８的成熟序列??＇－ＡＵＧＣＡＣＵＧＣＣＵＣＵＵＣＣ....

圖２－５?見／（財在不同組織中的表達(dá)量??不同字母表示有顯著差異（Ｐ＜〇．〇５）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－５?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?Ｓｍ－ＭＩＲ４０８?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｐｌａｎｔ?ｔｉｓｓｕｅｓ??

?洲在不同器官的相對表達(dá)水平??運(yùn)用實(shí)時定量ＰＣＲ方法檢測在丹參的根、莖、葉，花中表達(dá)，結(jié)??果如圖２－５所示，５ＶＷ－Ｍ／／Ｗ仰在不同組織中都有表達(dá)且表達(dá)量不同，在花中的表達(dá)??量最高，其次是葉、莖和根。??７?－Ｉ??—５?－??ｃ??．２?ｂ??？?４?－?Ｔ??＾?１??....

圖３－３不同處理?xiàng)l件下加－Ｍ／Ｔ＾仍的表達(dá)變化??不同字母表示有顯著差異（ｐ＜〇．〇５）??Ａ：?５００?ｕｍｏｌ／Ｌ?ＭｅＪＡ?Ｂ：機(jī)械損傷??Ｃ：光?

用５００ｕｍｏｌ／Ｌ茉莉酸甲酯（ｍｅｔｈｙｌｊａｍｓｏｎａｔｅＭｅＪＡ）處理丹參植株，ｌｈ后表達(dá)量??開始降低，在８?ｈ達(dá)到最低值，表達(dá)量僅為對照的１０％，之后升高，在２４?ｈ其表達(dá)量??與對照沒有顯著性差異（圖３－３Ａ）；機(jī)械損傷處理１?ｈ后加－Ｍ／Ｍ＾表達(dá)量最低，為對??照的....

本文編號：4016288