水稻供養(yǎng)世界一半以上的人口,是世界上最重要的糧食作物之一,也是我國南方的主要糧食作物。因此提高水稻的品質(zhì)和種植效益對我國農(nóng)業(yè)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有重要的影響。同時隨著人民生活品質(zhì)的提升和消費的多元化,越來越多的人傾向于食用香米,如泰國香米、茉莉花香米。此外,雜交水稻是我國南方水稻的主要栽培品種,但在雜交稻種的生產(chǎn)過程由于不育系與恢復(fù)系的相間種植,容易影響雜交稻種的純度及機(jī)械化水平,因此培育除草劑敏感的恢復(fù)系,將極大的降低雜交水稻種子生產(chǎn)的人工成本,提高雜交水稻生產(chǎn)的機(jī)械化水平。本文以苯達(dá)松敏感基因(Bel)和香味基因(BADH2)為研究對象,利用近幾年出現(xiàn)的新型基因編輯技術(shù)CRISPR/Cas9定向修飾水稻的BADH2基因和Bel基因,經(jīng)過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Cas9系統(tǒng)轉(zhuǎn)染水稻愈傷從而得到一系列的轉(zhuǎn)基因植株,通過傳統(tǒng)的PCR技術(shù)、限制性核酸酶酶切和測序等方法檢測到一個或多個堿基的替換、插入。實驗初步建立了 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的靶向修飾體系和水稻遺傳轉(zhuǎn)化的過程。主要研究結(jié)果如下:(1)靶位點-Cas9重組表達(dá)載體的構(gòu)建:利用生物信息學(xué)和基因工程等的技術(shù)手段在BADH2基因中選擇了 3個靶標(biāo)并分...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１：?３種特異性核酸酶模式圖（單奇?zhèn)サ龋玻埃保担??Ａ：辭指核酸酶；Ｂ：?ＴＡＬＥ核酸酶：Ｃ：?ＣＲ１ＳＰＲ／Ｃａｓ９系統(tǒng)??Ｆｉｇ．ｌ?Ｔｈｒｅｅ?化ｃｈｎｉｑｉｉｅｓ?ｏｆ?ｇｅｎｏｍｅ?ｅｄｉｄｎｇ．??

圖１：?３種特異性核酸酶模式圖（單奇?zhèn)サ龋玻埃保担??Ａ：辭指核酸酶；Ｂ：?ＴＡＬＥ核酸酶：Ｃ：?ＣＲ１ＳＰＲ／Ｃａｓ９系統(tǒng)??Ｆｉｇ．ｌ?Ｔｈｒｅｅ?化ｃｈｎｉｑｉｉｅｓ?ｏｆ?ｇｅｎｏｍｅ?ｅｄｉｄｎｇ．??Ａ：?ＺＮＦｓ；?Ｂ：?ＴＡＬＥＮｓ；?Ｃ：?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａ....

圖２；?ＣＲＩＳＰＲ的基本結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇ．２?Ｅｌｅｎｉｅｎ化ｒｙ?ｓ化ｕｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ｅｌｅｍｅｎ化ｒｙ?ｓｈｕｃｔｕｒｅ??

Ｆｉｇ．２?Ｅｌｅｎｉｅｎ化ｒｙ?ｓ化ｕｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ｅｌｅｍｅｎ化ｒｙ?ｓｈｕｃｔｕｒｅ??１．２．１?３’端?ＣＲＩＳＰＲ?基因座??如圖２所示，ＣＲＩＳＰＲ的基因座位于ＣＲＩＳＰ民的３’端，由相間排列的正向重復(fù)序??列（ＣＲｌＳＰＲｓ）和來源于外源病毒的間隔序列組成，....

圖４：?ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９系統(tǒng)誘發(fā)的觀向基因編輯??Ｆｉｇ．４：?Ｔａｒｇｅ化ｄ??

１．４．２?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ技術(shù)的應(yīng)用??ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系統(tǒng)的作用特點類似于限制性內(nèi)切酶，ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ的特異性識別依??賴于ｃｒＲＮＡ與Ｃａｓ蛋白，如圖４所示，兩者形成的復(fù)合體能夠識別ＰＡＭ位點化及??ｐｒｏｔｏｓｐａｃｅｒ�？茖W(xué)家們利用這種識別機(jī)制設(shè)計出人工的....

圖10:質(zhì)粒pCAMBIA

乂ｂｆｌｌ雙酶切檢測。Ｂ：�。睿旌蛥sｅｌ雙酶切檢測。Ｍ：化ｂＭａｒｋｅｒ；ｌ粒。??Ｆｉｇ．?１０?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｓｈｏｗｉｎｇ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｄｅ化ｃｌ：ｅｄ?ｂｙ?ｔｈｅ?ＲＥ?ａｓｓａｙ???ｓｈｏｗｉｎｇ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｄｅ化幻ｅｄ?ｂｙ?化ｅ?ＲＥ?ａｓｓ....

本文編號：3988045