大豆(Glycie max)是重要的經(jīng)濟(jì)作物,屬于中度耐鹽性植物。利用現(xiàn)代育種手段,培育高耐鹽性大豆種質(zhì)資源,充分利用鹽堿地等邊際土地種植大豆,以緩解大豆的進(jìn)口依賴度的需求變得越來(lái)越迫切。鹽漬化土壤對(duì)植物產(chǎn)生的危害主要是Na+的毒害作用,植物中的SOS1蛋白(salt overly sensitive 1,SOS1)是細(xì)胞膜上的Na+/H+逆轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,主要介導(dǎo)Na+外排或Na+區(qū)域化來(lái)減少Na+對(duì)細(xì)胞的危害。前期利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)已成功獲得了大豆Na+/H+逆轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GmSOS1的突變體植株系。本研究,利用PCR、測(cè)序和CAPS分子標(biāo)記技術(shù),對(duì)已經(jīng)獲得的T3和T4代大豆突變體植株系進(jìn)行檢測(cè),并根據(jù)其突變類型進(jìn)行分類,進(jìn)行了耐鹽性評(píng)價(jià)及基因功能的初步分析。研究結(jié)果為探討耐鹽性差異與不同編輯位點(diǎn)之間的相關(guān)性,闡明大豆GmSOS1耐鹽性調(diào)控機(jī)理,獲得具有育種價(jià)值的耐鹽性大豆新種質(zhì)資源奠定理論與實(shí)踐基礎(chǔ)。本研究的主要結(jié)果如下:(1)前期利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù),編輯大豆GmSOS1激活域和自抑制域之間的連接序列,獲得了大豆Gmsos1突變系。根據(jù)多序列比對(duì)及生...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１植物細(xì)胞中ＳＯＳ途徑示意圖ｔ５］??注：１４－３－３：?１４－３－３?蛋白；ＧＩ：?（ＧＩＧＡＮＴＥＡ）?ＧＩＧＡＮＴＥＡ?蛋白；ＳＣａＢＰ?１／８：?（ｃａｌｃｉｕｍ－ｂｉｎｄｉｎｇ??ｐｒｏｔｅｉｎｌ／８）鈣結(jié)合蛋白?１／８；?ＮＨＸ：?（Ｎａ＋／Ｈ＋ｅｘｃｈａｎｇｅｒ）鈉離子／氫質(zhì)子交換蛋白，？?ＰＫＳ５／２４：?（Ｓ０Ｓ２－ｌｉｋｅ??

１．１植物中的ＳＯＳ途徑??高鹽環(huán)境下，為降低細(xì)胞內(nèi)Ｎａ＋的大量積累，植物通過(guò)限制Ｎａ＋攝取、增加Ｎａ＋外??排和對(duì)細(xì)胞內(nèi)Ｎａ＋的區(qū)隔等策略以降低細(xì)胞質(zhì)中的Ｎａ＋濃度，維持相對(duì)較高的Ｋ＋／Ｎａ＋??比，進(jìn)而保證植物的正常生命活動(dòng)⑴。??在這些過(guò)程中起關(guān)鍵作用的是質(zhì)膜Ｎａ＋／Ｈ＋逆....

圖１－２擬南芥ＡｔＳＯＳｌ功能域及激活機(jī)制Ｍ２３】??注：ＡｔＳＯＳｌ包括Ｎ－端跨膜域（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ?ｄｏｍａｉｎｓ，?ＴＭ，黃色）、與ＡｔＮＨＸ８同源的胞內(nèi)??

ＳＯＳ１也成為目前己知的最長(zhǎng)的Ｎａ＋／Ｈ＋逆轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，ＳＯＳ１蛋白Ｎ端的跨膜??區(qū)和Ｃ端位于細(xì)胞質(zhì)中的長(zhǎng)鏈尾巴共同構(gòu)成了一個(gè)同源二聚體結(jié)構(gòu)。ＳＯＳ１蛋白的跨膜??結(jié)構(gòu)域與胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域相互作用來(lái)抑制其轉(zhuǎn)運(yùn)活性（圖１－２）?［２２，２３］。無(wú)鹽脅迫時(shí)，ＡｔＳＯＳｌ??的Ｃ末端自抑制域與....

圖1礴植物5051蛋白多序列比對(duì)

用擬南芥ＡｔＳＯＳｌ?（ＡＴ２Ｇ０１９８０）的信息通過(guò)ｐｈｙｔｏｚｏｍｅｌＯ同源比對(duì)獲得??（Ｇｌｙｍａ．０８Ｇ０９２０００）基因序列信息。Ｓ０Ｓ１功能域和進(jìn)化樹(shù)分析顯示，大豆Ｓ０Ｓ１蛋白??和其他物種中的２２個(gè)沿基因具有高度同源的Ｎａ＋／Ｈ＋交換域，因此可能與其他已知??物種的....

圖１－５大豆遺傳轉(zhuǎn)化載體３５Ｓ：ｈＳｐＣａｓ９?－?ｐＧｍＵ６?－?ｓｇＲＮＡ構(gòu)建示意圖??Ａ：ＣａＭＶ３５Ｓ啟Ｃａｓ９，?ｓＲＮＡＧｍＵ６，ＮＬＳ

接序列設(shè)計(jì)２個(gè)ｓｇＲＮＡ位點(diǎn)（ＳＧ１和ＳＧ２），并構(gòu)建載體ｐＣＢＳＧ０４－ＧｍＵ６：ｓｇＲＮＡ－??ＣａＭＶ３５Ｓ：Ｃａｓ９，將重組載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌ＥＨＡ１９５后利用子葉節(jié)轉(zhuǎn)入大豆ｗｉｌｌｉａｍｓ８２中??（圖１－５）。從ＴＯ代開(kāi)始在主莖第二片復(fù)葉完全展開(kāi)時(shí)（Ｖ２期）進(jìn)行草丁膦抗性....

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