植物脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(lipid transfer proteins,LTPs)廣泛存在于植物中,是一種調(diào)控植物多個生長發(fā)育過程并與脂質(zhì)轉(zhuǎn)移、角質(zhì)層形成以及脅迫響應(yīng)相關(guān)的小分子堿性蛋白。本研究首先對大麥中的LTPs基因家族進(jìn)行了全基因組分析,然后再利用PCR技術(shù)從青稞‘肚里黃’中克隆得到16個LTPs家族基因,并對這16個從青稞中克隆獲得的LTPs家族基因序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析,也對該家族基因的組織和脅迫表達(dá)模式進(jìn)行了研究。同時為深入探究Ht LTP基因在青稞抗逆生理中的作用,構(gòu)建了4個Ht LTP基因表達(dá)載體,進(jìn)而開展擬南芥轉(zhuǎn)基因研究,為進(jìn)一步研究Ht LTP的功能提供支撐。主要研究結(jié)果如下:1.大麥中的LTP基因家族進(jìn)行了全基因組分析,共鑒定出40個LTP基因,可分為4種類型(1、2、D和G),并對40個大麥LTPs的理化特性、蛋白序列、系統(tǒng)進(jìn)化、基因及蛋白結(jié)構(gòu)、染色體分布、種間種內(nèi)的共線性、上游順式元件及表達(dá)模式等的預(yù)測和分析,發(fā)現(xiàn)40個LTP基因符合LTP特性且表達(dá)的模式呈現(xiàn)出組織特異性。此外,LTP基因響應(yīng)非生物脅迫的表達(dá)模式表明大麥中的LTP基因與脅迫抗性有關(guān)。2.青稞中克隆得...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
    1.環(huán)境脅迫因子對作物的影響及其生理機(jī)制
    2.大麥和青稞簡述
    3.非特異性脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的研究進(jìn)展
        3.1 非特異性脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)構(gòu)特征
        3.2 非特異性脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的分類
        3.3 非特異性脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的抗逆性
    4.本研究的目的及意義
第2章 大麥LTPS基因家族生物信息學(xué)分析
    1.材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 大麥基因組中LTP基因的鑒定
            1.2.2 多序列比對和系統(tǒng)發(fā)育重建
            1.2.3 蛋白質(zhì)基序和基因結(jié)構(gòu)分析
            1.2.4 染色體定位和基因重復(fù)
            1.2.5 大麥Hv LTP基因的啟動子分析
            1.2.6 大麥Hv LTP基因的組織表達(dá)分析
            1.2.7 大麥Hv LTP基因的脅迫表達(dá)分析
    2.結(jié)果與分析
        2.1 大麥中Hv LTP成員的鑒定
        2.2 大麥Hv LTP基因家族分類及序列分析
        2.3 大麥Hv LTP家族的系統(tǒng)發(fā)育和結(jié)構(gòu)分析
        2.4 大麥Hv LTP基因的染色體定位和基因復(fù)制
        2.5 大麥Hv LTP基因的啟動子及表達(dá)分析
        2.6 大麥Hv LTP基因脅迫表達(dá)分析
    3 討論
第3章 青稞LTPS基因家族的克隆
    1.材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 植物材料的培養(yǎng)
            1.2.2 青稞總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
            1.2.3 PCR擴(kuò)增
            1.2.4 產(chǎn)物回收
            1.2.5 連接轉(zhuǎn)化
            1.2.6 質(zhì)粒提取及保菌驗(yàn)證測序
            1.2.7 生物信息學(xué)分析
    2.結(jié)果與分析
        2.1 青稞LTPs基因的克隆
        2.2 青稞LTPs預(yù)測蛋白的理化特性
        2.3 青稞LTPs家族基因的蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.4 青稞LTPs家族基因的聚類分析
        2.5 HvLTP.13 啟動子順式作用元件分析
    3.討論
第4章 青稞LTPS基因的表達(dá)分析
    1.材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 植物材料的培養(yǎng)
            1.2.2 青稞總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
            1.2.3 熒光定量PCR
            1.2.4 數(shù)據(jù)處理
    2.結(jié)果與分析
        2.1 組織表達(dá)
        2.2 脅迫表達(dá)
            2.2.1 冷脅迫表達(dá)
            2.2.2 旱脅迫表達(dá)
            2.2.3 鹽脅迫表達(dá)
    3.討論
第5章 青稞LTPS基因轉(zhuǎn)基因研究
    1.材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 擬南芥培養(yǎng)
            1.2.2 表達(dá)載體構(gòu)建
            1.2.3 擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化(浸花法)
            1.2.4 轉(zhuǎn)基因植物純合體的篩選及表型觀察
            1.2.5 青稞HtLTP1 轉(zhuǎn)基因擬南芥生理指標(biāo)測定
    2.結(jié)果與分析
        2.1 表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2 擬南芥轉(zhuǎn)基因篩選
            2.2.1 潮霉素篩選轉(zhuǎn)基因植株
            2.2.2 PCR驗(yàn)證擬南芥轉(zhuǎn)基因
        2.3 青稞HtLTP1 轉(zhuǎn)基因擬南芥表型分析
        2.4 青稞HtLTP1 轉(zhuǎn)基因擬南芥生理分析
    3.討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
作者簡介
致謝



本文編號：3939205