水稻(Oryza sativa L.)是世界上最主要的糧食作物之一,水稻的產(chǎn)量受到全世界的關(guān)注。但是由于病蟲害,病原微生物,洪澇災(zāi)害,土壤污染等原因?qū)е滤緶p產(chǎn)。提高水稻自身抗性是最好的解決辦法,而植物的抗性是由一系列基因調(diào)控的,所以有必要對植物的抗性基因進行探索研究。植物激素在植物的生長發(fā)育過程中起著不可代替的作用。茉莉酸信號途徑在植物防御/脅迫應(yīng)答起著關(guān)鍵性的作用,脂氧合酶(Lipoxygenase,LOX)是茉莉酸合成途徑中的第一個關(guān)鍵酶,以前的研究表明丙二烯氧化物合酶(Allene oxide synthase,AOS)與防御脅迫應(yīng)答相關(guān)。在本研究中,我們以茉莉酸途徑相關(guān)基因(OsLOX4,OsLOX3和OsAOS2)為研究對象。對OsLOX4和OsAOS2上游啟動子序列進行分析,OsAOS2基因的啟動子區(qū)含有TC-rich repeats,預(yù)測OsAOS2參與防御脅迫應(yīng)答,與以前研究結(jié)果相一致,OsLOX4基因啟動子含有創(chuàng)傷響應(yīng)元件,參與水楊酸,茉莉酸甲酯激素響應(yīng),在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了過表達載體OsAOs2-OE和OsLOX-4OE,農(nóng)桿菌侵染轉(zhuǎn)化,組織培養(yǎng)后,篩選驗證,最后得到...

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 稻瘟病
    1.2 植物的免疫系統(tǒng)
    1.3 茉莉酸信號分子途徑
    1.4 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物與供試菌株
        2.1.2 培養(yǎng)基及溶液
        2.1.3 生化試劑
        2.1.4 抗生素
    2.2 試驗方法
        2.2.1 目的基因序列的獲得
        2.2.2 目的基因的啟動子分析
        2.2.3 CTAB法提取水稻基因組DNA
        2.2.4 引物設(shè)計
        2.2.5 目的基因片段的擴增
        2.2.6 E.coli DH5α感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.7 DNA的回收純化
        2.2.8 質(zhì)粒的提取
        2.2.9 酶切與連接
        2.2.10 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞
        2.2.11 菌液PCR驗證
        2.2.12 農(nóng)桿菌EHA105感受態(tài)的制備
        2.2.13 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌EHA105感受態(tài)細(xì)胞
        2.2.14 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草瞬時轉(zhuǎn)化
        2.2.15 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌EHA105浸染水稻
        2.2.16 轉(zhuǎn)基因植株的初篩
        2.2.17 水稻RNA提取
        2.2.18 RNA的反轉(zhuǎn)錄
        2.2.19 Real-time PCR檢測基因的表達水平
        2.2.20 水稻的接種實驗
3 結(jié)果與分析
    3.1 水稻過表達載體的構(gòu)建
    3.2 生物信息學(xué)分析
    3.3 OsAOS2的亞細(xì)胞定位
    3.4 過表達水稻的獲得
    3.5 過表達水稻的驗證
        3.5.1 OsLOX4過表達水稻的篩選
        3.5.2 OsAOS2過表達水稻的篩選
    3.6 lox3接種稻瘟病菌后相關(guān)基因的表達
4 結(jié)論與討論
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3919761