玉米是我國重要的糧食作物,但我國的干旱和鹽漬土地嚴(yán)重影響玉米的產(chǎn)量。棉子糖家族系列寡糖(Raffinose Family Oligosaccharides:RFOs)在植物遭受逆境脅迫過程中大量積累,對植物抵御逆境脅迫起著積極的作用。本實驗室通過同源克隆方法在玉米中克隆到了唯一一個玉米棉子糖合成酶基因(ZmRS)。ZmRS基因的表達(dá)受到熱激、脫水等非生物逆境脅迫的誘導(dǎo),其突變后會影響種子活力。在擬南芥中超表達(dá)ZmRS基因能增強擬南芥對非生物逆境脅迫的耐受能力。本研究將ZmRS基因進(jìn)行了原核表達(dá),并對ZmRS蛋白進(jìn)行了純化回收,用純化的蛋白對兔子進(jìn)行免疫,制備了ZmRS抗體。對抗體進(jìn)行效價檢測,顯示ZmRS抗體能夠檢測出含量低至10 ng的ZmRS蛋白,且特異性較高。構(gòu)建了ZmRS基因的玉米超表達(dá)載體。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入玉米葉肉原生質(zhì)體并提取總蛋白進(jìn)行western-blot檢測,經(jīng)檢測,轉(zhuǎn)入ZmRS基因的玉米葉肉原生質(zhì)體能高效表達(dá)ZmRS蛋白。將ZmRS基因玉米超表達(dá)載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌Agl1株系后,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法對玉米自交系A(chǔ)188的幼胚進(jìn)行侵染。通過對轉(zhuǎn)化材料的篩選和再生,最終獲...

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 引言
    1.2 棉子糖及其代謝通路
    1.3 棉子糖與植物逆境耐受能力和種子活力密切相關(guān)
    1.4 棉子糖抵御非生物逆境脅迫的作用機制
    1.5 棉子糖代謝相關(guān)的酶
        1.5.1 肌醇半乳糖苷合成酶
        1.5.2 棉子糖合成酶
        1.5.3 α-半乳糖苷酶
    1.6 玉米遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展
    1.7 研究目的和意義
第二章 材料方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和載體
        2.1.3 主要試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 基因擴增及載體構(gòu)建
        2.2.2 玉米葉肉原生質(zhì)體的制備及其轉(zhuǎn)化
        2.2.3 原核表達(dá)與蛋白純化
        2.2.4 多克隆抗體制備
        2.2.5 農(nóng)桿菌侵染法轉(zhuǎn)化玉米幼胚及再生植株的獲得
        2.2.6 轉(zhuǎn)基因植株鑒定
第三章 實驗結(jié)果與分析
    3.1 ZmRS基因的同源克隆
    3.2 載體的構(gòu)建及檢測
    3.3 玉米棉子糖原核表達(dá)及蛋白純化
    3.4 抗體的制備及檢測
    3.5 ZmRS玉米超表達(dá)載體表達(dá)效率鑒定
    3.6 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化玉米幼胚及轉(zhuǎn)基因植株再生
    3.7 再生玉米植株P(guān)CR鑒定
    3.8 再生玉米T1代幼苗western-blot鑒定
第四章 討論
    4.1 ZmRS蛋白原核表達(dá)及其純化
    4.2 ZmRS蛋白抗體的制備
    4.3 玉米轉(zhuǎn)化
    4.4 利用western-blot分析不同株系ZmRS蛋白表達(dá)量
參考文獻(xiàn)
附錄
縮略表
致謝
作者簡介



本文編號：3909467