轉(zhuǎn)基因安全管理和標(biāo)識制度的實施需要標(biāo)準(zhǔn)化的檢測方法和轉(zhuǎn)基因檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是獲得準(zhǔn)確、可靠、可比檢測結(jié)果的保證。轉(zhuǎn)基因玉米T25為我國批準(zhǔn)進(jìn)口用作加工原料的轉(zhuǎn)基因植物。為加強(qiáng)對T25的監(jiān)管,以T25基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為研究對象,建立數(shù)字PCR方法,并選擇8家實驗室,采用數(shù)字PCR聯(lián)合定值測定。結(jié)果表明,T25/Adh1二重數(shù)字PCR系統(tǒng)具有良好的擴(kuò)增特異性。初始模板量在100～10 000拷貝·μL^-1之間可獲得穩(wěn)定、可靠的檢測結(jié)果。通過多實驗室協(xié)同定值說明T25/Adh1二重數(shù)字PCR方法準(zhǔn)確、可靠。T25基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量值為1.001 2,相對不確定度為0.001 6。研究表明建立的T25/Adh1二重數(shù)字PCR方法可以用于轉(zhuǎn)基因玉米T25的定量檢測,為轉(zhuǎn)基因成分定量檢測提供了物質(zhì)基礎(chǔ)和技術(shù)保證。

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【部分圖文】：

圖1T25的PCR擴(kuò)增圖譜

參照農(nóng)業(yè)部869號公告-14-2007《轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測耐除草劑玉米T25及其衍生品種定性PCR方法》[13]進(jìn)行PCR檢測。PCR結(jié)果(圖1)顯示,陰性對照和空白對照的T25基因檢測結(jié)果均為陰性;5～10號樣品的T25基因檢測結(jié)果為陽性,含有T25轉(zhuǎn)化體,但是無法滿....

圖2T25和Adh1二重數(shù)字PCR特異

不同玉米品種的T25/Adh1二重數(shù)字PCR檢測結(jié)果(圖2)顯示,Adh1基因在空白對照中無陽性微滴,但在轉(zhuǎn)基因玉米MON863、MON810、NK603、MIR604、TC1507和非轉(zhuǎn)基因玉米NTC中均擴(kuò)增正常。在Adh1基因擴(kuò)增正常的情況下,T25基因只有在轉(zhuǎn)基因玉米T25....

圖3數(shù)字PCR的動力學(xué)范圍測試

微滴式數(shù)字PCR的理論有效線性范圍是1～120000個拷貝,但20μL反應(yīng)液在微滴生成器中只能產(chǎn)生12000～16000個有效微滴,微滴數(shù)大于10000為有效反應(yīng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),當(dāng)DNA模板量為1.8×105拷貝時,所有微滴均呈陽性,超出數(shù)字PCR的動力學(xué)范圍。其他濃度微滴....

本文編號：3898933