賴氨酸脫羧酶基因(SaLDC)是苦豆子中氧化苦參堿和苦參堿生物合成的第一個(gè)關(guān)鍵酶基因,在其生物代謝過程中具有重要意義。本研究以寧夏中藥材苦豆子為材料,對(duì)實(shí)驗(yàn)室已有子葉節(jié)再生體系進(jìn)一步優(yōu)化,并以此優(yōu)化的再生體系為基礎(chǔ),將構(gòu)建的SaLDC超表達(dá)載體以傳統(tǒng)方法和原位轉(zhuǎn)化方法分別遺傳轉(zhuǎn)化苦豆子子葉節(jié),獲得T0代轉(zhuǎn)基因植株,為SaLDC基因功能研究奠定基礎(chǔ)。用NaCl溶液模擬鹽環(huán)境脅迫苦豆子種子,分析種子萌發(fā)時(shí)的耐鹽閾值和耐鹽相關(guān)的生理特性、SaLDC的基因表達(dá)及與該基因直接產(chǎn)物尸胺(Cad)含量的關(guān)系;同時(shí)花序侵染法將SaLDC超表達(dá)載體遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥,用NaCl溶液脅迫轉(zhuǎn)基因擬南芥T2代株系,探討SaLDC對(duì)鹽脅迫的響應(yīng)。得到以下研究結(jié)果:(1)苦豆子愈傷組織誘導(dǎo)的最佳外植體是子葉節(jié),優(yōu)化后的苦豆子子葉節(jié)再生體系,最佳叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+1.25 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 NAA;最佳叢生芽增殖培養(yǎng)基為:MS+1.5 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 NAA+0.3 mg·L-1 IBA。(2)構(gòu)建超表達(dá)載體pCAMBIA3301-SaLDC,將預(yù)培養(yǎng)2...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

圖２－１苦豆子子葉節(jié)最佳誘導(dǎo)分化（Ａ）和增殖（Ｂ）培養(yǎng)??

圖２４重組質(zhì)粒ｐＣＡＭＢＩＡ３３０１＋ＳａＩ￡？Ｃ農(nóng)桿菌菌液ＰＣＲ檢測(cè)??注：ｈ?ＤＬ２０００?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ：?２－９?重組質(zhì)粒ＣＡＭＢＩＡ３３０１＋ＳａｉＯＣ??

圖２－６農(nóng)桿菌介導(dǎo)傳統(tǒng)遺傳轉(zhuǎn)化法的苦豆子子葉節(jié)叢生芽的誘導(dǎo)??

圖２－５傳統(tǒng)遺傳轉(zhuǎn)化法苦豆子轉(zhuǎn)基因植株的ＰＣＲ鑒定??－

本文編號(hào)：3884333