干旱、鹽、低溫等非生物脅迫以及病原菌、昆蟲(chóng)等生物脅迫嚴(yán)重威脅著植物的生存以及糧食的產(chǎn)出,直接威脅著人類的生存。本論文以超強(qiáng)抗寒白菜型冬油菜新品種隴油6號(hào)和抗寒較弱品種天油2號(hào)兩種白菜型油菜為實(shí)驗(yàn)材料,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-RCR)技術(shù)研究非生物脅迫對(duì)白菜型油菜Rboh基因家族中RbohC/F基因表達(dá)的影響、活性氧的積累以及抗氧化酶活性的影響,并分析白菜型油菜RbohC/尸基因、活性氧、抗氧化酶活性同MAP激酶級(jí)聯(lián)途徑之間的調(diào)控關(guān)系,并為植物抗逆研究提供一定的理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1、白菜型油菜隴油6號(hào)和天油2號(hào)不同組織經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)顯示,白菜型油菜RbohC/F基因在隴油6號(hào)和天油2號(hào)根、莖、葉及下胚軸中均有表達(dá),說(shuō)明RbohC/F基因在不同組織中的表達(dá)為組成型表達(dá)且存在差異。經(jīng)低溫(4℃)、鹽、干旱、H2O2及ABA脅迫后,兩種白菜型油菜中RbohC/F基因表達(dá)均受到誘導(dǎo)。隨冷脅迫時(shí)間延長(zhǎng)、鹽濃度的升高、外源H202濃度的升高,白菜型油菜RbohC/F基因的表達(dá)量均呈先升后降的趨勢(shì);隨PEG-6000濃度的增大,白菜型油菜RbohC/F基因的表達(dá)量呈上...

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一部分 緒論
    1.1 活性氧的調(diào)控機(jī)制:產(chǎn)生與清除
        1.1.1 活性氧的產(chǎn)生
        1.1.2 活性氧的清除
            1.1.2.1 活性氧(ROS)的清除機(jī)制—非酶系統(tǒng)
            1.1.2.2 活性氧(ROS)的清除機(jī)制—酶系統(tǒng)
    1.2 活性氧(ROS)在信號(hào)傳導(dǎo)中的作用
        1.2.1 活性氧(ROS)調(diào)控細(xì)胞增殖
        1.2.2 活性氧(ROS)參與調(diào)控細(xì)胞PCD過(guò)程
        1.2.3 活性氧(ROS)參與植物獲得性免疫
    1.3 活性氧(ROS)與絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)通路
    1.4 NADPH氧化酶簡(jiǎn)述
    1.5 NADPH氧化酶活性調(diào)控
        1.5.1 鈣離子、磷酸化協(xié)同調(diào)控NADPH氧化酶活性
        1.5.2 脫落酸(ABA)與NADPH氧化酶活性調(diào)節(jié)
        1.5.3 蛋白之間的相互作用調(diào)控NADPH氧化酶的活性
    1.6 MAP激酶級(jí)聯(lián)途徑與NADPH氧化酶活性調(diào)節(jié)
    1.7 本研究的目的及意義
第二部分 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料的培養(yǎng)與處理
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料的培養(yǎng)
        2.1.2 材料處理
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 白菜型油菜RbohC、 RbohF基因CDS區(qū)克隆
            2.2.1.1 油菜葉片總RNA的提取
            2.2.1.2 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA的第一條鏈
            2.2.1.3 油菜RbohC、 RbohF基因CDS區(qū)的克隆
            2.2.1.4 目的基因回收
            2.2.1.5 構(gòu)建重組載體
            2.2.1.6 重組載體的鑒定
            2.2.1.7 菌株與載體
        2.2.2 白菜型油菜RbohC、RbohF基因表達(dá)分析
            2.2.2.1 白菜型油菜RbohC、RbohF在不同組織的表達(dá)
            2.2.2.2 不同脅迫下白菜型油菜RbohC、RbohF的表達(dá)
        2.2.3 鹽、干旱脅迫下抗氧化酶活性及H₂O₂含量的測(cè)定
            2.2.3.1 材料的處理
            2.2.3.2 抗氧化酶活性的測(cè)定
            2.2.3.3 H₂O₂含量的測(cè)定
        2.2.4 NBT、DAB染色
    2.3 藥品及試劑
    2.4 儀器設(shè)備
    2.5 PCR擴(kuò)增及定量引物
    2.6 數(shù)據(jù)分析
第三部分 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 RbohC、RbohF基因CDS區(qū)克隆
        3.1.1 白菜型油菜總RNA的提取
        3.1.2 白菜型油菜RbohC、RbohF基因CDS克隆
    3.2 油菜RbohC、RbohF基因的表達(dá)
        3.2.1 油菜RbohC、RbohF基因在不同組織的表達(dá)
        3.2.2 油菜RbohC、RbohF基因在逆境脅迫下的表達(dá)分析
            3.2.2.1 不同逆境下RbohC、RbohF基因的表達(dá)分析
        3.2.3 不同抑制劑對(duì)RbohC、RbohF基因表達(dá)的影響
        3.2.4 抑制劑預(yù)處理再逆境脅迫對(duì)RbohC、RbohF基因表達(dá)的影響
    3.3 鹽及干旱脅迫對(duì)活性氧的影響
        3.3.1 鹽脅迫對(duì)兩種油菜H₂O₂和O2
-的影響
        3.3.2 干旱脅迫對(duì)兩種油菜H₂O₂和O2
-的影響
        3.3.3 不同抑制劑對(duì)活性氧的影響
        3.3.4 不同抑制劑預(yù)處理后鹽及干旱脅迫對(duì)H₂O₂的影響
    3.4 逆境脅迫對(duì)抗氧化酶活性的影響
        3.4.1 鹽脅迫對(duì)兩種油菜抗氧化酶活性的影響
        3.4.2 干旱脅迫對(duì)兩種油菜抗氧化酶活性的影響
        3.4.3 抑制劑對(duì)抗氧化酶活性的影響
        3.4.4 抑制劑預(yù)處理后經(jīng)鹽和干旱脅迫對(duì)抗氧化酶活性的影響
第四部分 討論
    4.1 油菜RbohC及RbohF基因在不同組織的表達(dá)
    4.2 MAP激酶級(jí)聯(lián)途徑參與調(diào)控逆境下油菜RbohC及RbohF基因的表達(dá)
    4.3 MAP激酶級(jí)聯(lián)途徑參與活性氧(ROS)的調(diào)節(jié)
    4.4 MAP激酶級(jí)聯(lián)途徑參與Rboh基因表達(dá)的調(diào)節(jié)
第五部分 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3873816

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