小麥是全球最重要的糧食作物之一,在其生長發(fā)育的各個階段會面臨諸多逆境脅迫因素的影響,比如干旱、鹽漬、低溫、低K⁺等,這些因素影響其產(chǎn)量和品質(zhì)。研究小麥對這些逆境脅迫信號的感知、轉(zhuǎn)導和響應機理對提高小麥的產(chǎn)量和品質(zhì)是非常重要的。Ca²⁺作為第二信使,能夠感知外界脅迫信號而做出特異的濃度改變,傳遞信號到下游Ca²⁺感受器,引起相應的生理生化反應來應對逆境脅迫。植物中主要存在4類Ca²⁺感受器,分別是鈣調(diào)素CaM(Calmodulins),類鈣調(diào)素CmL(calmodulin-like),鈣依賴性蛋白激酶CDPKs(Calcium-dependent protein kinases),以及類鈣調(diào)磷酸酶B蛋白CBLs(Calcineurin B-like proteins)。CBLs(Calcineurin B-like proteins)是類似于酵母和動物體內(nèi)鈣調(diào)磷酸酶B的一種蛋白,而CIPKs(CBL-interacting protein kinase)是CBLs互作蛋白激酶,它們與Ca^2+...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
1 文獻綜述
    1.1 植物逆境脅迫和應對方式
        1.1.1 植物逆境脅迫
        1.1.2 植物應對逆境脅迫的方式
    1.2 植物應對非生物脅迫的生理機制
        1.2.1 直接作用物質(zhì)
        1.2.2 間接作用物質(zhì)
    1.3 鈣信使及鈣信號的傳導
        1.3.1 鈣依賴蛋白激酶CDPKs
        1.3.2 鈣調(diào)素CaM和類鈣調(diào)素蛋白CmL
        1.3.3 CBLs蛋白及其靶蛋白CIPKs
    1.4 CBLs-CIPKs信號系統(tǒng)
        1.4.1 CBLs-CIPKs信號網(wǎng)絡的機制
        1.4.2 CBLs-CIPKs信號系統(tǒng)的功能研究
2 引言
3 試驗材料與方法
    3.1 試驗材料
        3.1.1 植物材料和菌株
        3.1.2 克隆載體
        3.1.3 生化試劑和試劑盒
        3.1.4 試驗儀器
        3.1.5 PCR引物
    3.2 試驗方法
        3.2.1 RNA提取及反轉(zhuǎn)錄反應
        3.2.2 目的基因克隆
    3.3 小麥TaCIPK5和TaCIPK8基因的生物信息學分析
    3.4 TaCIPK5和TaCIPK8基因的表達水平分析
        3.4.1 材料的處理
        3.4.2 熒光引物的合成和RT-PCR反應
        3.4.3 熒光實時定量PCR的結(jié)果分析
    3.5 TaCBLs和TaCIPKs的酵母雙雜交試驗分析
        3.5.1 酵母雙雜交所用載體和菌株
        3.5.2 試劑和培養(yǎng)基
        3.5.3 目的基因和酵母雙雜交表達載體的構(gòu)建
        3.5.4 酵母感受態(tài)細胞制備和重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化及鑒定
        3.5.5 融合蛋白自激活活性的測定
        3.5.6 酵母雙雜交及其蛋白相互作用的鑒定
4 結(jié)果與分析
    4.1 RNA及cDNA檢測
    4.2 小麥TaCIPK5和TaCIPK8基因的全長克隆
    4.3 小麥TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的生物信息學分析
        4.3.1 小麥TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的理化性質(zhì)分析
        4.3.2 小麥TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的疏水性/親水性預測與分析
        4.3.3 小麥TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域預測
        4.3.4 小麥TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的同源性分析
        4.3.5 小麥TaCIPK5和TaCIPK8蛋白序列的功能結(jié)構(gòu)域分析
        4.3.6 小麥TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的磷酸化位點分析
    4.4 小麥TaCIPK5和TaCIPK8基因的表達分析
        4.4.1 融解曲線分析
        4.4.2 小麥TaCIPK5基因的表達分析
        4.4.3 小麥TaCIPK8基因的表達分析
    4.5 小麥TaCIPKs與TaCBLs蛋白的互作分析
        4.5.1 酵母雙雜交表達載體的構(gòu)建及鑒定
        4.5.2 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化及鑒定
        4.5.3 融合蛋白毒性和自激活活性檢測
        4.5.4 TaCBLs與TaCIPKs相互作用鑒定
5 結(jié)論與討論
    5.1 小麥TaCIPK5和TaCIPK8基因的克隆
    5.2 TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的生物信息學分析
    5.3 不同脅迫下TaCIPK5和TaCIPK8基因的表達分析
    5.4 酵母雙雜交試驗檢測TaCBLs和TaCIPKs基因的相互作用
    5.5 全文結(jié)論
參考文獻
ABSTRACT
英文縮略表



本文編號：3870661