甘藍(lán)型油菜是我國(guó)最重要的油料作物之一。千粒重(Thousand Seed Weight,TSW)作為甘藍(lán)型油菜單株產(chǎn)量的構(gòu)成因素之一,是甘藍(lán)型油菜遺傳改良的重要目標(biāo)。雖然前人研究檢測(cè)到大量控制千粒重的數(shù)量性狀位點(diǎn)(Quantitative Trait Loci,QTL),但多數(shù)研究只停留在初定位階段,目前只有兩個(gè)千粒重QTL被克隆。本研究通過(guò)構(gòu)建大粒親本ZY50和小粒親本7-5的雙單倍體(Double Haploid,DH)群體,對(duì)甘藍(lán)型油菜千粒重進(jìn)行了遺傳解析,共檢測(cè)到6個(gè)環(huán)境間穩(wěn)定存在的主效QTL。同時(shí),針對(duì)其中一個(gè)主效QTL cq SW.A03-2構(gòu)建了近等基因系并開(kāi)展了精細(xì)定位和候選基因分析。主要結(jié)果如下:1.甘藍(lán)型油菜DH群體遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建。利用ZY50和7-5組合的DH群體,構(gòu)建了一張包含2,237個(gè)SNP(Single Nucleotide Polymorphism)標(biāo)記和65個(gè)SSR(Simple Sequence Repeat)標(biāo)記的高密度遺傳連鎖圖譜。該圖譜包含19個(gè)連鎖群,總長(zhǎng)度為1,951.5 c M,標(biāo)記平均間距為0.85 c M。共線性分析表明,該連鎖圖...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)表
1 前言
    1.1 研究問(wèn)題的由來(lái)
    1.2 甘藍(lán)型油菜千粒重的研究進(jìn)展
        1.2.1 千粒重的遺傳
        1.2.2 千粒重的QTL定位
        1.2.3 千粒重的關(guān)聯(lián)分析
        1.2.4 千粒重QTL的克隆
        1.2.5 通過(guò)反向遺傳學(xué)研究油菜粒重調(diào)控機(jī)理
        1.2.6 影響油菜粒重的其他因素
        1.2.7 油菜粒重的遺傳改良
    1.3 作物數(shù)量性狀解析策略研究
        1.3.1 基于雙親衍生群體的連鎖分析
        1.3.2 基于多親本衍生群體的連鎖分析
        1.3.3 基于多親本衍生群體的關(guān)聯(lián)分析
        1.3.4 基于自然群體的關(guān)聯(lián)分析
        1.3.5 基于混合群體的測(cè)序分析
    1.4 種子大小調(diào)控機(jī)制研究
        1.4.1 模式植物擬南芥種子大小調(diào)控機(jī)理研究
        1.4.2 AHK基因家族調(diào)控種子大小機(jī)理研究
    1.5 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
    2.2 田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)和性狀考察
        2.2.1 田間試驗(yàn)與表型考察
        2.2.2 數(shù)據(jù)分析
    2.3 DH群體基因型鑒定
        2.3.1 DNA提取
        2.3.2 DH標(biāo)記分析
    2.4 標(biāo)記開(kāi)發(fā)和分析
    2.5 遺傳連鎖圖譜構(gòu)建
    2.6 QTL檢測(cè)
    2.7 QTL整合
    2.8 QTL上位性檢測(cè)
    2.9 前景選擇和背景選擇
    2.10 cqSW.A03-2局部遺傳連鎖圖譜構(gòu)建和效應(yīng)分析
    2.11 cqSW.A03-2的精細(xì)定位
    2.12 目標(biāo)區(qū)間候選基因序列分析
        2.12.1 重測(cè)序數(shù)據(jù)比對(duì)
        2.12.2 TA克隆與比較測(cè)序
    2.13 候選基因表達(dá)分析
        2.13.1 油菜總RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄
        2.13.2 q RT-PCR
    2.14 關(guān)聯(lián)分析
    2.15 遺傳轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建
        2.15.1 候選基因互補(bǔ)載體構(gòu)建
        2.15.2 啟動(dòng)子活性檢測(cè)載體構(gòu)建
    2.16 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化
        2.16.1 油菜遺傳轉(zhuǎn)化方法
        2.16.2 轉(zhuǎn)基因植株檢測(cè)
    2.17 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
        2.17.1 試劑制備
        2.17.2 擬南芥原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化和瞬時(shí)表達(dá)
        2.17.3 報(bào)告基因的檢測(cè)
3 結(jié)果與分析
    3.1 親本ZY50和7-5及其衍生后代千粒重表型變異和遺傳分析
        3.1.1 親本千粒重表現(xiàn)
        3.1.2 親本及DH群體表型分析
    3.2 DH群體標(biāo)記分析與遺傳連鎖圖譜構(gòu)建
        3.2.1 遺傳連鎖圖譜構(gòu)建
        3.2.2 DH群體標(biāo)記偏分離檢測(cè)和基因型組成分析
        3.2.3 連鎖圖譜的共線性分析
    3.3 DH群體QTL檢測(cè)
        3.3.1 QTL定位與整合
        3.3.2 QTL上位性分析
    3.4 cqSW.A03-2位點(diǎn)近等基因系的構(gòu)建
        3.4.1 BC1F1群體的遺傳分析
        3.4.2 低世代回交群體標(biāo)記分析
        3.4.3 高世代回交群體cqSW.A03-2位點(diǎn)遺傳效應(yīng)分析
    3.5 cqSW.A03-2的精細(xì)定位
        3.5.1 群體標(biāo)記分析
        3.5.2 cqSW.A03-2位點(diǎn)的精細(xì)定位
        3.5.3 cqSW.A03-2對(duì)其他產(chǎn)量相關(guān)性狀的影響
        3.5.4 候選區(qū)間內(nèi)注釋基因序列分析和表達(dá)分析
    3.6 Bna A.AHK2.a候選基因的克隆
        3.6.1 Bna A.AHK2.a基因比較測(cè)序
        3.6.2 Bna A.AHK2.a的表達(dá)分析
    3.7 候選基因關(guān)聯(lián)分析
    3.8 候選基因的互補(bǔ)載體構(gòu)建和遺傳轉(zhuǎn)化
    3.9 候選基因啟動(dòng)子活性分析
4 討論
    4.1 油菜千粒重QTL定位及其影響因素
        4.1.1 油菜千粒重QTL定位結(jié)果比較
        4.1.2 影響QTL效應(yīng)和定位的因素
    4.2 QTL效應(yīng)與精細(xì)定位
        4.2.1 QTL精細(xì)定位策略
        4.2.2 微效QTL的定位策略
    4.3 cqSW.A03-2位點(diǎn)調(diào)控油菜千粒重的生理基礎(chǔ)
    4.4 cqSW.A03-2調(diào)控油菜千粒重可能的分子機(jī)理
參考文獻(xiàn)
附錄 Ⅰ QTL定位群體中所用到的相關(guān)引物
附錄 Ⅱ 前景選擇引物匯總
附錄 Ⅲ 作者簡(jiǎn)介和在讀期間發(fā)表論文
致謝



本文編號(hào)：3864279