茶樹咖啡酰輔酶A-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(CCoAOMT)是一類S-腺苷-L-甲硫氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶,主要參與木質(zhì)素和甲基化EGCGs的生物合成。本研究克隆了茶樹CCoAOMT基因,優(yōu)化了 CCoAOMT誘導(dǎo)表達(dá)條件,對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究,并采用PCR目的區(qū)域擴(kuò)增結(jié)合Sanger測(cè)序的方法分析其單核苷酸多態(tài)性。主要研究結(jié)果如下:1、以金牡丹茶樹品種為實(shí)驗(yàn)材料,通過RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出茶樹CCoAOMT基因編碼區(qū)全序列,并將其克隆到表達(dá)載體pET-28a中,得到重組質(zhì)粒pET-CCoAOMT,將重組質(zhì)粒在表達(dá)宿主菌B121(DE3)中高效表達(dá),得到相對(duì)分子量約為28KDa的重組蛋白。重組表達(dá)菌株在IPTG濃度為0.5mM,誘導(dǎo)溫度為37℃,誘導(dǎo)時(shí)間為4H時(shí),誘導(dǎo)表達(dá)效果最佳。2、體外酶促反應(yīng)表明,CCoAOMT重組蛋白能催化EGCG合成EGCG3”Me。結(jié)果表明,該酶的最適反應(yīng)溫度為37℃,最適pH為4,以EGCG為反應(yīng)底物,最佳濃度為 0.05mmol/LEGCG。3、本研究以茶樹GAPDH為內(nèi)參基因,對(duì)不同茶樹品種中CCoAOMT基因表達(dá)進(jìn)行了比較分析。結(jié)果表明,CCoAOMT基因在肉桂、迎...

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 茶樹兒茶素的研究進(jìn)展
    1.2 甲基化EGCG的研究進(jìn)展
    1.3 茶樹咖啡酰輔酶A-O-甲基轉(zhuǎn)移酶的研究進(jìn)展
    1.4 單核苷酸多態(tài)性研究現(xiàn)狀
    1.5 茶樹單核苷酸多態(tài)性研究現(xiàn)狀
    1.6 研究目的及意義
    1.7 研究?jī)?nèi)容
第二章 茶樹CCoAOMT基因克隆及原核表達(dá)
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 茶樹鮮葉RNA提取
        2.2.2 CCoAOMT基因PCR克隆
        2.2.3 CCoAOMT基因原核表達(dá)
        2.2.4 CCoAOMT重組蛋白純化
    2.3 小結(jié)與討論
第三章 茶樹CCoAOMT基因功能鑒定
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 CCoAOMT酶促反應(yīng)
        3.2.2 CCoAOMT酶促反應(yīng)最適反應(yīng)底物EGCG濃度
        3.2.3 CCoAOMT酶促反應(yīng)最適溫度
        3.2.4 CCoAOMT酶促反應(yīng)最適PH
    3.3 小結(jié)與討論
第四章 不同茶樹品種中CCoAOMT基因表達(dá)分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 甲基化兒茶素在不同品種中變化規(guī)律
        4.2.2 不同茶樹品種real-timePCR分析
    4.3 小結(jié)與討論
第五章 茶樹CCoAOMT基因的單核苷酸多態(tài)性分析
    5.1 材料和方法
        5.1.1 材料、試劑與儀器
        5.1.2 方法
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 CCoAOMT基因外顯子的SNPs分析
        5.2.2 發(fā)生酶切位點(diǎn)變異的外顯子SNPs
        5.2.3 導(dǎo)致氨基酸變異的外顯子SNPs
        5.2.4 外顯子SNPs變異類型分析
        5.2.5 茶樹CCoAOMT基因內(nèi)含子多樣性情況
    5.3 小結(jié)與討論
第六章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3827858