干旱是影響植物生長(zhǎng)發(fā)育和產(chǎn)量至關(guān)重要的非生物脅迫因素之一。植物內(nèi)生菌和植物的共生以及相互作用不僅能夠促進(jìn)植物的生長(zhǎng)發(fā)育,還能提高植物對(duì)干旱脅迫的抵抗能力。本研究從西北荒漠地區(qū)采集的駱駝刺植物組織中分離獲得一株內(nèi)生細(xì)菌LTYR-11Z,通過16S r RNA基因和atp D,gyr B,inf B,rpo B等保守持家基因的序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)LTYR-11Z屬于Pantoea屬。生理生化特征、脂肪酸組分和DNA-DNA雜交等多相分類研究結(jié)果表明菌株LTYR-11Z是Pantoea屬的1個(gè)新種,將其命名為Pantoea alhagi sp.nov。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),該菌株具有非常強(qiáng)的抗逆性,能夠耐受9%氯化鈉(Na Cl)、48℃高溫、20%聚乙二醇(PEG),在p H5.0-9.0的范圍內(nèi)生長(zhǎng),同時(shí)含有多種促進(jìn)植物生長(zhǎng)的(plant growth-promoting,PGP)特性,如能夠溶解無機(jī)磷、產(chǎn)生吲哚乙酸(IAA)、鐵載體、胞外多糖(EPS)、蛋白酶和氨。本實(shí)驗(yàn)通過共聚焦顯微觀察,檢測(cè)了綠色熒光蛋白標(biāo)記的Pantoea alhagi LTYR-11Z對(duì)小麥和擬南芥的定殖能力,...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物內(nèi)生菌概述
        1.1.1 植物內(nèi)生菌定義
        1.1.2 植物內(nèi)生細(xì)菌的多樣性
        1.1.3 植物內(nèi)生細(xì)菌及其生物學(xué)作用
    1.2 植物內(nèi)生細(xì)菌與植物相互作用提高作物的抗逆性
        1.2.1 植物內(nèi)生細(xì)菌在植物內(nèi)定殖研究
        1.2.2 植物內(nèi)生細(xì)菌促作物抗干旱研究
    1.3 轉(zhuǎn)座子及轉(zhuǎn)座子誘變
        1.3.1 轉(zhuǎn)座子簡(jiǎn)介及其應(yīng)用
        1.3.2 Tn5轉(zhuǎn)座子特點(diǎn)和應(yīng)用
    1.4 脂多糖
    1.5 選題的依據(jù)、目的和意義
        1.5.1 研究的依據(jù)
        1.5.2 目的和意義
        1.5.3 技術(shù)路線
第二章 駱駝刺內(nèi)生細(xì)菌Pantoea alhagi LTYR-11Z的分離鑒定
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑和培養(yǎng)基
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 內(nèi)生細(xì)菌LTYR-11Z的分離
        2.3.2 內(nèi)生細(xì)菌LTYR-11Z 16S rRNA測(cè)定
        2.3.3 內(nèi)生細(xì)菌LTYR-11Z保守基因擴(kuò)增
        2.3.4 DNA G+C含量測(cè)定和DNA-DNA雜交
        2.3.5 全細(xì)胞脂肪酸
        2.3.6 表型特征
        2.3.7 PGP特征及非生物脅迫抵抗能力
        2.3.8 植物根部吸附
        2.3.9 盆栽實(shí)驗(yàn)
    2.4 結(jié)果分析
        2.4.1 測(cè)序系統(tǒng)進(jìn)化分析
        2.4.2 基因組G+C含量和DNA-DNA雜交分析
        2.4.3 全細(xì)胞脂肪酸分析
        2.4.4 表型特征分析
        2.4.5 PGP結(jié)果與非生物脅迫抵抗能力分析
        2.4.6 植物根部吸附能力分析
        2.4.7 菌株LTYR-11Z促進(jìn)作物生長(zhǎng)和提高作物抗逆性分析
    2.5 討論
第三章 LTYR-11Z小麥根部吸附能力下降突變體的獲得及突變基因的鑒定
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)試劑和培養(yǎng)基
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 雙親株濾膜結(jié)合法
        3.3.2 小麥根部吸附能力下降突變株的篩選
        3.3.3 吸附能力下降突變體正確性的驗(yàn)證
        3.3.4 小麥根部吸附能力下降相關(guān)基因鑒定
    3.4 結(jié)果分析
        3.4.1 突變體庫的構(gòu)建及小麥根部吸附能力下降突變體的篩選分析
        3.4.2 小麥根部吸附能力下降突變體正確性的驗(yàn)證分析
        3.4.3 菌落PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)化出單克隆的正確性分析
        3.4.4 Tn5插入位點(diǎn)blast比對(duì)定位分析以及物理圖譜繪制
    3.5 討論
第四章 突變基因的敲除及其功能研究
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)試劑和培養(yǎng)基
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 感受態(tài)制備
        4.3.2 waaG基因突變體構(gòu)建
        4.3.3 敲除質(zhì)粒PK18-ΔwaaG的構(gòu)建
        4.3.4 waaG基因缺失突變體篩選
        4.3.5 互補(bǔ)質(zhì)粒pBBR1-MCS-waaG的構(gòu)建
        4.3.6 表型實(shí)驗(yàn)
        4.3.7 綠色熒光標(biāo)記和紅色熒光標(biāo)記菌株的制備以及小麥根部吸附共聚焦顯微鏡觀察
        4.3.8 小麥根部短期定殖的方法
        4.3.9 盆栽干旱脅迫實(shí)驗(yàn)
    4.4 結(jié)果分析
        4.4.1 表型實(shí)驗(yàn)分析
        4.4.2 植物根部吸附分析
        4.4.3 植物根部短期吸附和定殖結(jié)果分析
        4.4.4 盆栽實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
    4.5 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3826064