本文首先對(duì)冬蟲(chóng)夏草的基本情況進(jìn)行了概述,然后從冬蟲(chóng)夏草菌的生物學(xué)特性、無(wú)性型的研究以及冬蟲(chóng)夏草相關(guān)菌的研究進(jìn)行了重點(diǎn)綜述。針對(duì)冬蟲(chóng)夏草菌一直未實(shí)現(xiàn)科赫氏法則的完整驗(yàn)證而存在爭(zhēng)議,本實(shí)驗(yàn)希望通過(guò)對(duì)冬蟲(chóng)夏草上菌株的特性研究,為解決這一問(wèn)題提供有益探索。以新鮮冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體部分為實(shí)驗(yàn)材料,進(jìn)行組織分離和子囊孢子分離,獲取冬蟲(chóng)夏草上的真菌菌株,并對(duì)其進(jìn)行了分類鑒定,對(duì)新發(fā)現(xiàn)的菌株進(jìn)行了基本的生物學(xué)特性,其與中國(guó)被毛孢之間的關(guān)系,以及對(duì)寄主蝙蝠蛾幼蟲(chóng)的侵染率進(jìn)行了研究,本實(shí)驗(yàn)主要取得了以下研究成果:1.發(fā)明了一種簡(jiǎn)單高效實(shí)用的冬蟲(chóng)夏草子囊孢子分離方法—光斑標(biāo)記法。2.組織分離得到了中國(guó)被毛孢菌株若干株,子囊孢子單孢分離菌株115株。3.分離鑒定了5株中國(guó)被毛孢以外的新菌株,其中TB-1為產(chǎn)黃青霉Penicillium chrysogenum;TB-3和TB-4為枝孢菌Cladosporium sp.、FD為鐮刀菌Fusarium sp.、MR-1可能是一未知新種。4.對(duì)5株真菌進(jìn)行基本生物學(xué)特性研究,確定了其最適溫度、pH、碳源、氮源。5.確定了5株真菌與中國(guó)被毛孢的相關(guān)關(guān)系,5株供試菌株均能通...

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 冬蟲(chóng)夏草的概述
        1.1.1 形態(tài)特征與生活史
        1.1.2 資源與分布
        1.1.3 化學(xué)成分和藥理作用
        1.1.4 人工開(kāi)發(fā)與應(yīng)用
    1.2 冬蟲(chóng)夏草菌的生物學(xué)特性
        1.2.1 菌落培養(yǎng)特征
        1.2.2 菌絲顯微特征
        1.2.3 分離方法
    1.3 冬蟲(chóng)夏草無(wú)性型的研究
        1.3.1 冬蟲(chóng)夏草無(wú)性型的確證
        1.3.2 冬蟲(chóng)夏草菌無(wú)性型的爭(zhēng)議
    1.4 冬蟲(chóng)夏草相關(guān)菌的研究
        1.4.1 相關(guān)菌的提出
        1.4.2 相關(guān)菌與中國(guó)被毛孢的關(guān)系
        1.4.3 ITS序列在真菌鑒定中的應(yīng)用
    1.5 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 供試冬蟲(chóng)夏草(Cordyceps sinensis)
        2.1.2 供試蝙蝠蛾幼蟲(chóng)
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.5 相關(guān)培養(yǎng)基和溶液
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體的組織分離、純化與培養(yǎng)
        2.2.2 冬蟲(chóng)夏草子囊孢子單孢菌株的光斑法分離
        2.2.3 DNA的提取和檢測(cè)
        2.2.4 ITS序列擴(kuò)增反應(yīng)及DNA測(cè)序
        2.2.5 生物學(xué)特性研究
        2.2.6 分離菌株與中國(guó)被毛孢相互作用研究
        2.2.7 分離菌株侵染冬蟲(chóng)夏草寄主蝙蝠蛾幼蟲(chóng)試驗(yàn)
        2.2.8 數(shù)據(jù)處理
3 結(jié)果與分析
    3.1 菌株的分離
        3.1.1 中國(guó)被毛孢的組織分離、純化和培育
        3.1.2子囊孢子的萌發(fā)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
        3.1.3 中國(guó)被毛孢形態(tài)子囊孢子單孢菌株的光斑法分離
        3.1.4 中國(guó)被毛孢形態(tài)以外真菌菌株的分離
    3.2 分離菌株的形態(tài)學(xué)描述
    3.3 分子鑒定
        3.3.1 分離菌株基因組DNA的電泳檢測(cè)
        3.3.2 分離菌株P(guān)CR產(chǎn)物的電泳檢測(cè)
        3.3.3 序列比對(duì)結(jié)果
        3.3.4 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析
    3.4 生物學(xué)特性
        3.4.1 溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響
        3.4.2 pH對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響
        3.4.3 碳源對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響
        3.4.4 氮源對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響
    3.5 供試菌株與中國(guó)被毛孢相關(guān)關(guān)系研究
        3.5.1 對(duì)峙培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
        3.5.2 供試菌株與供試中國(guó)被毛孢ITS序列相似度比較分析
    3.6 蝙蝠蛾幼蟲(chóng)回接侵染實(shí)驗(yàn)
        3.6.1 MR-1 侵染蝙蝠蛾幼蟲(chóng)
        3.6.2 TB-3 侵染蝙蝠蛾幼蟲(chóng)
        3.6.3 TB-4 菌株侵染蝙蝠蛾幼蟲(chóng)
        3.6.4 TB-1 菌株侵染蝙蝠蛾幼蟲(chóng)
        3.6.5 FD菌株侵染蝙蝠蛾幼蟲(chóng)
4 討論
    4.1 中國(guó)被毛孢基因組DNA提取和ITS片段擴(kuò)增中的問(wèn)題
    4.2 中國(guó)被毛孢菌落形態(tài)多樣性的問(wèn)題
    4.3 溫度實(shí)驗(yàn)中溫度范圍的選擇問(wèn)題
    4.4 對(duì)峙實(shí)驗(yàn)中存在的問(wèn)題
    4.5 侵染實(shí)驗(yàn)中存在的問(wèn)題
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄 :測(cè)序結(jié)果
攻讀學(xué)位期間研究成果



本文編號(hào)：3820389