本文首先對冬蟲夏草的基本情況進行了概述,然后從冬蟲夏草菌的生物學特性、無性型的研究以及冬蟲夏草相關(guān)菌的研究進行了重點綜述。針對冬蟲夏草菌一直未實現(xiàn)科赫氏法則的完整驗證而存在爭議,本實驗希望通過對冬蟲夏草上菌株的特性研究,為解決這一問題提供有益探索。以新鮮冬蟲夏草子實體部分為實驗材料,進行組織分離和子囊孢子分離,獲取冬蟲夏草上的真菌菌株,并對其進行了分類鑒定,對新發(fā)現(xiàn)的菌株進行了基本的生物學特性,其與中國被毛孢之間的關(guān)系,以及對寄主蝙蝠蛾幼蟲的侵染率進行了研究,本實驗主要取得了以下研究成果:1.發(fā)明了一種簡單高效實用的冬蟲夏草子囊孢子分離方法—光斑標記法。2.組織分離得到了中國被毛孢菌株若干株,子囊孢子單孢分離菌株115株。3.分離鑒定了5株中國被毛孢以外的新菌株,其中TB-1為產(chǎn)黃青霉Penicillium chrysogenum;TB-3和TB-4為枝孢菌Cladosporium sp.、FD為鐮刀菌Fusarium sp.、MR-1可能是一未知新種。4.對5株真菌進行基本生物學特性研究,確定了其最適溫度、pH、碳源、氮源。5.確定了5株真菌與中國被毛孢的相關(guān)關(guān)系,5株供試菌株均能通...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 冬蟲夏草的概述
        1.1.1 形態(tài)特征與生活史
        1.1.2 資源與分布
        1.1.3 化學成分和藥理作用
        1.1.4 人工開發(fā)與應(yīng)用
    1.2 冬蟲夏草菌的生物學特性
        1.2.1 菌落培養(yǎng)特征
        1.2.2 菌絲顯微特征
        1.2.3 分離方法
    1.3 冬蟲夏草無性型的研究
        1.3.1 冬蟲夏草無性型的確證
        1.3.2 冬蟲夏草菌無性型的爭議
    1.4 冬蟲夏草相關(guān)菌的研究
        1.4.1 相關(guān)菌的提出
        1.4.2 相關(guān)菌與中國被毛孢的關(guān)系
        1.4.3 ITS序列在真菌鑒定中的應(yīng)用
    1.5 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 供試冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)
        2.1.2 供試蝙蝠蛾幼蟲
        2.1.3 實驗儀器
        2.1.4 實驗試劑
        2.1.5 相關(guān)培養(yǎng)基和溶液
    2.2 實驗方法
        2.2.1 冬蟲夏草子實體的組織分離、純化與培養(yǎng)
        2.2.2 冬蟲夏草子囊孢子單孢菌株的光斑法分離
        2.2.3 DNA的提取和檢測
        2.2.4 ITS序列擴增反應(yīng)及DNA測序
        2.2.5 生物學特性研究
        2.2.6 分離菌株與中國被毛孢相互作用研究
        2.2.7 分離菌株侵染冬蟲夏草寄主蝙蝠蛾幼蟲試驗
        2.2.8 數(shù)據(jù)處理
3 結(jié)果與分析
    3.1 菌株的分離
        3.1.1 中國被毛孢的組織分離、純化和培育
        3.1.2子囊孢子的萌發(fā)培養(yǎng)實驗
        3.1.3 中國被毛孢形態(tài)子囊孢子單孢菌株的光斑法分離
        3.1.4 中國被毛孢形態(tài)以外真菌菌株的分離
    3.2 分離菌株的形態(tài)學描述
    3.3 分子鑒定
        3.3.1 分離菌株基因組DNA的電泳檢測
        3.3.2 分離菌株P(guān)CR產(chǎn)物的電泳檢測
        3.3.3 序列比對結(jié)果
        3.3.4 系統(tǒng)發(fā)育樹分析
    3.4 生物學特性
        3.4.1 溫度對菌絲生長的影響
        3.4.2 pH對菌絲生長的影響
        3.4.3 碳源對菌株生長的影響
        3.4.4 氮源對菌株生長的影響
    3.5 供試菌株與中國被毛孢相關(guān)關(guān)系研究
        3.5.1 對峙培養(yǎng)實驗
        3.5.2 供試菌株與供試中國被毛孢ITS序列相似度比較分析
    3.6 蝙蝠蛾幼蟲回接侵染實驗
        3.6.1 MR-1 侵染蝙蝠蛾幼蟲
        3.6.2 TB-3 侵染蝙蝠蛾幼蟲
        3.6.3 TB-4 菌株侵染蝙蝠蛾幼蟲
        3.6.4 TB-1 菌株侵染蝙蝠蛾幼蟲
        3.6.5 FD菌株侵染蝙蝠蛾幼蟲
4 討論
    4.1 中國被毛孢基因組DNA提取和ITS片段擴增中的問題
    4.2 中國被毛孢菌落形態(tài)多樣性的問題
    4.3 溫度實驗中溫度范圍的選擇問題
    4.4 對峙實驗中存在的問題
    4.5 侵染實驗中存在的問題
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄 :測序結(jié)果
攻讀學位期間研究成果



本文編號：3820389