小麥在生長發(fā)育過程中可能會受到多種逆境的影響,其中營養(yǎng)脅迫和高鹽脅迫是限制作物生長的主要影響因子。植物MicroRNA參與植物生長發(fā)育過程多方面的調(diào)控,并且在介導(dǎo)植株抵御逆境中發(fā)揮重要的作用。因此,本研究以實驗室前期的工作積累為基礎(chǔ),對TaMIR9674a、TaMIR408以及TaMIR9780的分子特征和耐逆功能進行了研究,主要研究結(jié)果如下:1.TaMIR9674a和TaMIR9780對高鹽脅迫明顯應(yīng)答,其初始序列長度均為89 nt,成熟區(qū)序列長度均為20 nt,TaMIR9674a成熟序列位于13 nt至33 nt,TaMIR9780成熟序列位于68 nt至88 nt。2.在高鹽脅迫處理下,融合TaMIR9674a正義系煙草植株與野生型相比,植株長勢更健壯,鮮重增加,葉面積增大,保護酶活性升高,可溶性糖含量增加,丙二醛含量和電導(dǎo)率下降。反義系植株則表現(xiàn)出與正義系相反的結(jié)果。TaMIR9674a正義系煙草植株保護酶相關(guān)基因、ABA受體(PYL)相關(guān)基因及介導(dǎo)ABA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的SnRK2家族基因表達水平也發(fā)生了變化,TaMIR9674a正義表達轉(zhuǎn)基因煙草植株的SOD1、FeSOD、Mn1...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 引言
    1.1 植物miRNA的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 miRNA的概念與分子特征
        1.1.2 miRNA的研究歷史
    1.2 植物miRNA的合成及作用機制
        1.2.1 植物miRNA的生物合成
        1.2.2 植物miRNA的作用機理
        1.2.3 miRNA靶基因的預(yù)測及鑒定
    1.3 植物miRNA與逆境脅迫
        1.3.1 miRNA與植物的養(yǎng)分脅迫
        1.3.2 miRNA與其他非生物逆境脅迫
    1.4 本研究的目的意義
2 材料與方法
    2.1 植物材料的培養(yǎng)
        2.1.1 小麥材料的培養(yǎng)
        2.1.2 轉(zhuǎn)基因煙草株系的鑒定培養(yǎng)
    2.2 RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄
    2.3 基因序列的獲得
    2.4 基因的表達特征分析
    2.5 融合目的基因的雙元表達載體構(gòu)建
        2.5.1 克隆和測序
        2.5.2 融合目的基因的正、反義雙元表達載體構(gòu)建
    2.6 轉(zhuǎn)基因植株的建立及鑒定
        2.6.1 轉(zhuǎn)基因株系的建立
        2.6.2 轉(zhuǎn)基因植株陽性鑒定
    2.7 轉(zhuǎn)基因植株耐逆功能鑒定
        2.7.1 逆境脅迫下轉(zhuǎn)基因植株的表型鑒定
        2.7.2 逆境脅迫下轉(zhuǎn)基因植株生理指標的測定
        2.7.3 高鹽處理下氣孔開度測定
        2.7.4 逆境脅迫下轉(zhuǎn)基因植株的表達模式分析
    2.8 轉(zhuǎn)基因植株的轉(zhuǎn)錄組分析
    2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 TaMIR9674a分子特征及耐逆功能
        3.1.1 TaMIR9674a的分子特征
        3.1.2 TaMIR9674a克隆及測序
        3.1.3 TaMIR9674a在逆境下的表達模式
        3.1.4 TaMIR9674a靶基因預(yù)測
        3.1.5 TaMIR9674a正、反義雙元表達載體的構(gòu)建
        3.1.6 TaMIR9674a正、反義表達載體轉(zhuǎn)基因煙草的遺傳轉(zhuǎn)化及陽性鑒定
        3.1.7 高鹽脅迫下TaMIR9674a轉(zhuǎn)基因株系耐逆功能
        3.1.8 TaMIR9674a轉(zhuǎn)基因煙草植株中PYL和 Sn RK2 基因半定量分析
        3.1.9 TaMIR9674a轉(zhuǎn)基因煙草植株細胞保護酶相關(guān)基因的表達特征
        3.1.10 TaMIR9674a轉(zhuǎn)基因煙草植株生理生化指標
        3.1.11 高鹽處理下TaMIR9674a轉(zhuǎn)基因植株的氣孔關(guān)閉特征
        3.1.12 高鹽處理下TaMIR9674a轉(zhuǎn)基因植株的轉(zhuǎn)錄組分析
    3.2 TaMIR408 的耐逆功能鑒定
        3.2.1 TaMIR408 在小麥和煙草中的保守性
        3.2.2 TaMIR408 作用的靶基因
        3.2.3 miR408 及其靶基因?qū)Φ土缀透啕}脅迫的響應(yīng)
        3.2.4 TaMIR408 轉(zhuǎn)基因株系抵御低磷和高鹽脅迫能力的鑒定
    3.3 TaMIR9780 分子特征和遺傳轉(zhuǎn)化
        3.3.1 TaMIR9780 的分子特征
        3.3.2 TaMIR9780 的基因克隆
        3.3.3 逆境下Ta MIR9780 的表達模式
        3.3.4 融合TaMIR9780 正、反義序列的表達載體構(gòu)建
        3.3.5 TaMIR9780 轉(zhuǎn)基因株系抵御高鹽脅迫能力的鑒定
4 討論
    4.1 TaMIR9674a介導(dǎo)植株抵御高鹽脅迫的分子機制
    4.2 TaMIR408 在介導(dǎo)植株抵御低磷、高鹽脅迫中的功能
    4.3 TaMIR9780 應(yīng)答高鹽脅迫的特征及耐逆功能
5 結(jié)論
參考文獻
作者簡歷
致謝



本文編號：3775654