發(fā)布時(shí)間：2023-03-19 21:27

　　冬蟲夏草是蟲草真菌寄生于蝙蝠蛾幼蟲而生成的子座與蟲體的蟲菌復(fù)合體,中國(guó)被毛孢(Hirsutella sinensis)是公認(rèn)的冬蟲夏草無(wú)性型真菌,其功能和成分與冬蟲夏草高度相似,已成為野生冬蟲夏草的替代品。核苷作為中國(guó)被毛孢產(chǎn)品的一個(gè)重要指標(biāo),其對(duì)于提高產(chǎn)品質(zhì)量和增強(qiáng)市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力至關(guān)重要。本文針對(duì)中國(guó)被毛孢首次研究其原生質(zhì)體制備與再生,建立了原生質(zhì)體常壓室溫等離子(ARTP)與甲基磺酸乙酯(EMS)復(fù)合誘變技術(shù),獲得核苷高產(chǎn)菌株,并探究了核苷代謝途徑中關(guān)鍵酶的基因表達(dá)差異。本文首先對(duì)中國(guó)被毛孢菌株Hirsutella sinensis ZJB18002原生質(zhì)體的制備與再生方法進(jìn)行優(yōu)化,考察了滲透壓穩(wěn)定劑種類及濃度、裂解酶種類及濃度、酶解溫度、酶解時(shí)間和培養(yǎng)時(shí)間等因素對(duì)原生質(zhì)體制備的影響,獲得了最適的原生質(zhì)體制備條件:將培養(yǎng)7 d的中國(guó)被毛孢菌絲體懸浮于5 m L含0.6 mol/L KCl和3mg/m L破壁酶、4 mg/m L溶壁酶和3 mg/m L崩潰酶的0.1 mol/L磷酸鉀緩沖液(p H=5.5)中,于18℃,120 rpm酶解0.5 h,原生質(zhì)體產(chǎn)量達(dá)4.37×10^...

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 冬蟲夏草菌中國(guó)被毛孢研究進(jìn)展
    1.3 原生質(zhì)體技術(shù)研究進(jìn)展
    1.4 菌株選育
        1.4.1 ARTP誘變
        1.4.2 EMS誘變
        1.4.3 復(fù)合誘變
    1.5 中國(guó)被毛孢代謝途徑
        1.5.1 中國(guó)被毛孢代謝途徑研究進(jìn)展
        1.5.2 核苷代謝途徑
    1.6 本課題的選題背景與意義
        1.6.1 立題背景和意義
        1.6.2 本文主要研究?jī)?nèi)容
第二章 中國(guó)被毛孢原生質(zhì)體的制備與再生
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 菌株
        2.2.2 儀器與設(shè)備
        2.2.3 主要藥品與試劑
        2.2.4 培養(yǎng)基及溶液的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 中國(guó)被毛孢ZJB18002的培養(yǎng)
        2.3.2 中國(guó)被毛孢ZJB18002原生質(zhì)體制備
        2.3.3 原生質(zhì)體形成過程及活力檢測(cè)
        2.3.4 原生質(zhì)體再生
        2.3.5 統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 中國(guó)被毛孢ZJB18002原生質(zhì)體制備影響因素
        2.4.2 原生質(zhì)體形成過程及活力的檢測(cè)
        2.4.3 中國(guó)被毛孢ZJB18002原生質(zhì)體再生影響因素
    2.5 本章小結(jié)
第三章 中國(guó)被毛孢Hirsrtella sinensis ZJB18002 原生質(zhì)體的誘變
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 出發(fā)菌株
        3.2.2 儀器與設(shè)備
        3.2.3 主要藥品與試劑
        3.2.4 培養(yǎng)基與溶液的配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 分析方法
        3.3.2 原生質(zhì)體的制備
        3.3.3 ARTP誘變
        3.3.4 EMS誘變
        3.3.6 突變株的生理生化鑒定
        3.3.7 突變株的遺傳學(xué)鑒定
        3.3.8 統(tǒng)計(jì)分析
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 中國(guó)被毛孢 Hirsrtella sinensis ZJB18002 深層發(fā)酵曲線
        3.4.2 ARTP誘變
        3.4.3 EMS誘變
        3.4.4 復(fù)合誘變突變株穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
        3.4.5 突變株的生理生化和遺傳學(xué)鑒定
    3.5 本章小結(jié)
第四章 突變菌株核苷代謝途徑中關(guān)鍵酶的差異表達(dá)分析
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        4.2.2 儀器與設(shè)備
        4.2.3 主要藥品與試劑
        4.2.4 培養(yǎng)基與溶液的配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 總RNA提取
        4.3.2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
        4.3.3 RNA反轉(zhuǎn)錄獲得c DNA
        4.3.4 關(guān)鍵酶基因驗(yàn)證
        4.3.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        4.3.6 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
        4.3.7 統(tǒng)計(jì)分析
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 RNA的提取及質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果
        4.4.2 關(guān)鍵酶基因的挖掘
        4.4.3 關(guān)鍵酶基因的異源表達(dá)
        4.4.4 核苷代謝途徑中關(guān)鍵酶基因表達(dá)分析
    4.5 本章小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
    1 作者簡(jiǎn)歷
    2 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
    3 發(fā)明專利
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集



本文編號(hào)：3766013