蜜環(huán)菌是一類具有藥用和食用價值的高等真菌,是種植天麻的必備菌。近年來,云南天麻主產(chǎn)區(qū)昭通地區(qū)引入外來的蜜環(huán)菌種用于天麻種植過程中,出現(xiàn)了嚴(yán)重的菌種退化問題,導(dǎo)致天麻大量減產(chǎn),造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。經(jīng)多方調(diào)查,了解到部分天麻種植戶利用從當(dāng)?shù)厣掷铽@取的野生蜜環(huán)菌種植天麻,不僅產(chǎn)量高而且品質(zhì)好,表明該地區(qū)林地中具有可用于天麻生產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)蜜環(huán)菌種資源。本實(shí)驗在對昭通地區(qū)部分林地中野生蜜環(huán)菌進(jìn)行調(diào)查采樣,形態(tài)特征觀察分類基礎(chǔ)上,利用傳統(tǒng)培養(yǎng)分離技術(shù)及DNA測序技術(shù),對昭通5個地方的原始森林中采集的野生蜜環(huán)菌的子實(shí)體、菌索、孢子進(jìn)行了研究,菌株子實(shí)體通過生物學(xué)形態(tài)特征觀察分為16類,培養(yǎng)法共分離到野生蜜環(huán)菌40株。首先,測量了各菌株的菌落直徑、菌索長度、菌索分支、菌索顏色、菌株生長速率等生物學(xué)特性。其次,對40株野生蜜環(huán)菌的IGS(intergenic spacer)片段進(jìn)行了測序,將IGS序列相似度為97%的菌株定義為一個OTU,總計獲得13個OTUs;通過系統(tǒng)發(fā)育分析所有OTUs均為Armillaria屬,其中一個OTU為Armillaria sinapina種,其余菌株不能定種。最后,為探明...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 天麻研究概述
        1.1 天麻的藥用價值和地理分布
        1.2 天麻形態(tài)學(xué)特征和生活史
        1.3 天麻栽培與共生蜜環(huán)菌
    2 蜜環(huán)菌研究概況
        2.1 蜜環(huán)菌生活習(xí)性及分布狀況
        2.2 蜜環(huán)菌形態(tài)特征
        2.3 蜜環(huán)菌的生長條件
        2.4 蜜環(huán)菌生物多樣性
        2.5 蜜環(huán)菌漆酶酶活性研究進(jìn)展
    3 研究目的和意義
第二章 昭通野生蜜環(huán)菌形態(tài)、生理特征及遺傳多樣性研究
    1 材料和方法
        1.1 實(shí)驗儀器及試劑
            1.1.1 實(shí)驗儀器
            1.1.2 實(shí)驗試劑
        1.2 培養(yǎng)基
        1.3 方法
            1.3.1 野生蜜環(huán)菌采樣及保存方法
            1.3.2 野生蜜環(huán)菌子實(shí)體形態(tài)特征描述
        1.4 野生蜜環(huán)菌的分離和純化
            1.4.1 菌索分離
            1.4.2 子實(shí)體分離
            1.4.3 孢子分離
        1.5 野生蜜環(huán)菌菌株DNA的提取
        1.6 真菌IGS基因的擴(kuò)增
            1.6.1 PCR擴(kuò)增體系和條件
            1.6.2 反應(yīng)體系及擴(kuò)增條件
            1.6.3 PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠純化電泳檢測：
        1.7 序列測序
        1.8 不同培養(yǎng)基上的生物學(xué)特征描述及生理指標(biāo)測定
        1.9 數(shù)據(jù)分析
            1.9.1 序列OTU劃分
            1.9.2 系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建
            1.9.3 菌株各項指標(biāo)分析
    2 結(jié)果
        2.1 菌株采樣情況
        2.2 菌株子實(shí)體形態(tài)特征
        2.3 野生蜜環(huán)菌株種屬分子鑒定和系統(tǒng)發(fā)育
            2.3.1 野生蜜環(huán)菌株OTUs劃分
            2.3.2 野生蜜環(huán)菌株種屬鑒定
        2.4 野生蜜環(huán)菌株在不同培養(yǎng)基上的生長形態(tài)特征
            2.4.1 在玉米粉培養(yǎng)基上的生長特性
            2.4.2 在木屑培養(yǎng)基上的生長特性
            2.4.3 在木質(zhì)素培養(yǎng)基上的生長特性
        2.5 菌株菌落直徑
            2.5.1 菌索、子實(shí)體、孢子三種不同分離來源的菌株菌落直徑
            2.5.2 不同采樣地的菌株菌落直徑
            2.5.3 不同OTU的菌落直徑
        2.6 菌株菌索長度
            2.6.1 菌索、子實(shí)體、孢子三種不同分離來源菌索長度
            2.6.2 不同采樣地菌株菌索長度
            2.6.3 不同OTU菌株菌索長度
        2.7 菌株生長速率
            2.7.1 菌索、子實(shí)體、孢子三種不同分離來源的菌株生長速率
            2.7.2 不同采樣地菌株生長速率
            2.7.3 不同OTU菌株菌生長速率
第三章 野生蜜環(huán)菌株產(chǎn)酶特性初步研究
    1 材料儀器
        1.1 儀器
        1.2 試劑
        1.3 培養(yǎng)基
        1.4 實(shí)驗菌株
    2 方法
        2.1 昭通野生蜜環(huán)菌株分解木質(zhì)素的鑒定
        2.2 昭通野生蜜環(huán)菌株分解纖維素的鑒定
        2.3 昭通野生蜜環(huán)菌株的漆酶酶活測定
            2.3.1 酶活測定方法及原理
            2.3.2 菌株漆酶酶活測定
        2.4 均勻設(shè)計優(yōu)化產(chǎn)漆酶培養(yǎng)基
    3 結(jié)果和分析
        3.1 野生蜜環(huán)菌菌株分解木質(zhì)素鑒定結(jié)果
        3.2 野生蜜環(huán)菌菌株分解纖維素鑒定結(jié)果
        3.3 漆酶酶活測定
            3.3.1 不同分離來源的菌株漆酶活性
            3.3.2 不同采樣地菌株漆酶酶活性
            3.3.3 不同OUT的菌株漆酶活性
        3.4 高產(chǎn)漆酶菌株優(yōu)化培養(yǎng)基均勻設(shè)計
第四章 結(jié)論與討論
    1 昭通具有豐富的野生蜜環(huán)菌物種資源
    2 玉米培粉培養(yǎng)基適用于保存和研究野生蜜環(huán)菌株
    3 昭通野生蜜環(huán)菌能分解木質(zhì)素而不分解羧甲基纖維素
展望
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3764582