蛹蟲草具有抗腫瘤、抗衰老和明顯增強人體非特異性免疫系統(tǒng)的作用,在我國作為食藥用真菌而被廣泛應用。加強蛹蟲草活性成分的研究,以及各成分相關基因的研究有助于更好地開發(fā)其藥理功效,為其生物合成提供科學基礎。凝集素是一種非免疫來源的糖結合蛋白,能使細胞凝集或糖綴合物(glycoconjugate)沉淀。目前國內外學者對蛹蟲草中凝集素的研究報道屈指可數,而且現有報道僅限于直接從子實體中分離純化和生物學活性檢測的基礎研究,還沒有對蛹蟲草中凝集素基因方面的研究。在前期工作中,本研究團隊從蛹蟲草基因組中通過數據挖掘獲得了一個編碼Jacalin類凝集素的基因JRL-ccm4,在此基礎上,本研究對該凝集素編碼基因進行了生物信息學分析及原核異源表達,構建了高效異源表達體系,檢測了異源表達的凝集素的生物活性,并測定了蛹蟲草不同生長時期該凝集素編碼基因的表達水平。從生物信息學分析結果看,JRL-ccm4不同于之前報道的任何一種蛹蟲草凝集素,為蛹蟲草中又一新型凝集素,這表明蛹蟲草中可能存在多種凝集素。經SDS-PAGE電泳檢測,JRL-ccm4基因在大腸桿菌中成功表達出來,分子量與預測大小一致,且表達產物為可溶性...

【文章頁數】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 蛹蟲草
    1.2 凝集素的研究進展
        1.2.1 凝集素的定義和分類
        1.2.2 凝集素的結構及理化性質
        1.2.3 凝集素的生物學功能特性
        1.2.4 凝集素的應用
        1.2.5 Nem1(Nuclear envelope morphology protein 1)基因介紹
    1.3 本論文的主要研究內容
        1.3.1 蛹蟲草凝集素基因及編碼產物的生物信息學分析和功能研究
        1.3.2 蛹蟲草中 Nem1 基因功能探究
第2章 蛹蟲草凝集素基因及編碼產物的生物信息學分析和功能研究
    2.1 實驗材料和設備
        2.1.1 供試菌種
        2.1.2 培養(yǎng)基和主要試劑
        2.1.3 主要儀器設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 生物信息學分析工具
        2.2.2 蛹蟲草培養(yǎng)
        2.2.3 蛹蟲草不同生長時期凝集素基因表達量的測定
        2.2.4 凝集素基因的cDNA序列擴增與表達載體構建
        2.2.5 重組蛹蟲草凝集素蛋白的表達與提取
        2.2.6 SDS-PAGE電泳分析
        2.2.7 蛋白質濃度測定
        2.2.8 重組蛹蟲草凝集素蛋白抑菌活性測定
        2.2.9 重組蛹蟲草凝集素蛋白抑制腫瘤細胞增殖試驗
    2.3 實驗結果
        2.3.1 凝集素編碼基因的生物信息學分析結果
        2.3.2 蛹蟲草培養(yǎng)
        2.3.3 蛹蟲草不同生長時期凝集素基因表達量的測定
        2.3.4 重組蛹蟲草凝集素蛋白的表達與SDS-PAGE電泳分析
        2.3.5 凝集素蛋白濃度測定
        2.3.6 重組蛹蟲草凝集素蛋白抑菌活性
        2.3.7 重組蛹蟲草凝集素蛋白抑制腫瘤細胞增殖活性
    2.4 結論與討論
        2.4.1 結論
        2.4.2 討論
第3章 蛹蟲草中Nem1基因功能初探
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗菌株和載體
        3.1.2 培養(yǎng)基
    3.2 實驗方法
        3.2.1 蛹蟲草菌絲的培養(yǎng)與收集
        3.2.2 蛹蟲草基因組DNA的提取
        3.2.3 敲除及過表達載體的構建
        3.2.4 敲除載體轉化農桿菌(凍融法)
        3.2.5 根癌農桿菌介導的蛹蟲草遺傳轉化
        3.2.6 蛹蟲草轉化子驗證
        3.2.7 Nem1敲除菌株和過表達菌株表型分析
        3.2.8 Nem1敲除菌株侵染能力分析
        3.2.9 細胞核和脂滴熒光染色觀察
        3.2.10 細胞自噬相關基因的表達模式分析
    3.3 實驗結果
        3.3.1 Nem1基因生物信息學分析
        3.3.2 根癌農桿菌介導的絲狀真菌遺傳轉化
        3.3.3 Nem1敲除菌株和過表達菌株表性分析
        3.3.4 敲除菌株侵染能力分析
        3.3.5 細胞核及脂滴熒光染色觀察
        3.3.6 細胞自噬相關基因的表達模式分析
    3.4 結論與討論
        3.4.1 結論
        3.4.2 討論
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文及其它成果
致謝



本文編號：3761548