針對基于RNAi技術(shù)的轉(zhuǎn)基因玉米品系,研究并建立了一套逆轉(zhuǎn)錄芯片式數(shù)字PCR(dPCR)定量檢測該品系玉米雙鏈RNA的方法。研究內(nèi)容主要包括RNA提取方法、引物探針設(shè)計(jì)、逆轉(zhuǎn)錄方法、dPCR反應(yīng)條件及體系等方面的探索和優(yōu)化。該方法的絕對定量限為2.5 copies/μL,RSD為12.4%;檢測低濃度實(shí)際樣品達(dá)21.7 copies/μL時(shí),相對偏差為2.7%,RSD為14.6%,滿足國際上轉(zhuǎn)基因定量結(jié)果RSD≤25%的要求。將該方法用于基于RNAi技術(shù)轉(zhuǎn)基因作物的定量檢測,將為我國相關(guān)轉(zhuǎn)基因作物的安全評(píng)價(jià)提供了精確可靠的技術(shù)手段。

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 引物探針的設(shè)計(jì)
        1.2.2 轉(zhuǎn)基因玉米總RNA的抽提方法優(yōu)化
        1.2.3 RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA的方法優(yōu)化
        1.2.4 數(shù)字PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
        1.2.5 數(shù)字PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化
        1.2.6 實(shí)驗(yàn)方法的定量檢測低限的測定
2 結(jié)果
    2.1 引物探針的設(shè)計(jì)
    2.2 轉(zhuǎn)基因植物總RNA的提取方法優(yōu)化
    2.3 轉(zhuǎn)基因植物RNA的反轉(zhuǎn)錄方法優(yōu)化
    2.4 數(shù)字PCR反應(yīng)條件及體系優(yōu)化
        2.4.1 數(shù)字PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
        2.4.2 數(shù)字PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化
            2.4.2.1 探針濃度的優(yōu)化
            2.4.2.2 引物濃度的優(yōu)化
    2.5 實(shí)驗(yàn)方法的定量檢測低限
3 討論
4 結(jié)論



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