三葉木通(Akebia trifoliata(Thunb.)Koidz.)為木通科(Lardizabalaceae)木通屬(Akebia Decne.)藥用藤本植物,屬基部真雙子葉植物類群,在被子植物演化史上具有承上啟下的重要地位。三葉木通花的形態(tài)學研究發(fā)現(xiàn):發(fā)育初期是兩性花,后期雌花中的雄蕊及雄花中的心皮分別退化,從而形成功能上的單性花,可知三葉木通花的發(fā)育模式為Ⅰ型單性花發(fā)育途徑。但其兩性花發(fā)育為單性花的分子調(diào)控機制尚不清楚。研究表明,性別決定基因、表觀遺傳修飾和植物激素等是單性花性別分化的影響因素。MADS-box基因家族在調(diào)控單性花性別分化過程中占有重要地位。依據(jù)花發(fā)育“ABCDE”模型,其中的C類基因不僅為決定雄蕊和心皮發(fā)育的器官特征基因,而且很可能是調(diào)控植物性別分化的關(guān)鍵因素。A類基因不僅是決定萼片和花瓣發(fā)育的器官特征基因,并且對于模式生物擬南芥的研究發(fā)現(xiàn),A類基因與C類基因在功能上具有相互拮抗的關(guān)系。因此為了研究三葉木通兩性花發(fā)育為單性花的分子調(diào)控機制,探究三葉木通花發(fā)育A類和C類基因的關(guān)系,有必要對三葉木通A類及C類基因的功能進行研究。本研究為了了解三葉木通中A類和C類...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
英文縮寫詞表
第1章 文獻綜述
    1.1 被子植物花的性別發(fā)育
    1.2 被子植物花發(fā)育的分子機制研究概述
        1.2.1 花發(fā)育調(diào)控網(wǎng)絡概述
        1.2.2 花發(fā)育模型
    1.3 A類及C類基因的研究進展概述
        1.3.1 A類及C類基因的結(jié)構(gòu)進化
        1.3.2 A類及C類基因的功能進化
        1.3.3 蛋白互作研究技術(shù)及其發(fā)展
    1.4 三葉木通花發(fā)育的研究進展
        1.4.1 三葉木通花的形態(tài)學特征
        1.4.2 三葉木通花發(fā)育的分子機制研究
        1.4.3 實驗室前期工作
        1.4.4 研究意義
第2章 三葉木通AktFL1、AktAG1基因的半定量表達研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要實驗儀器
        2.1.4 實驗準備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 三葉木通雌雄花不同時期總RNA的提取
        2.2.2 半定量RT-PCR
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 總RNA提取質(zhì)量檢測
        2.3.2 AktFL1、AktAG1基因的半定量表達結(jié)果分析
    2.4 討論
        2.4.1 AktFL1基因的表達分析
        2.4.2 AktAG1基因的表達分析
第3章 三葉木通AktFL1、AktAG1基因轉(zhuǎn)擬南芥過表達研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株與載體
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要實驗儀器
        3.1.5 引物測序
    3.2 實驗方法
        3.2.1 三葉木通總RNA的提取
        3.2.2 AktFL1、AktAG1基因ORF的克隆
        3.2.3 AktFL1、AktAG1基因過表達載體的構(gòu)建
        3.2.4 重組表達載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞
        3.2.5 農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化擬南芥植株
        3.2.6 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的鑒定與表型觀察
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 35S:AktFL1和35S::AktAG1過表達載體的構(gòu)建
        3.3.2 35S::AktFL1轉(zhuǎn)基因植株的分子鑒定
        3.3.3 35S::AktAG1轉(zhuǎn)基因植株的分子鑒定
        3.3.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的表型分析
    3.4 討論
        3.4.1 AktFL1基因?qū)òl(fā)育的調(diào)控功能
        3.4.2 AktAG1基因?qū)òl(fā)育的調(diào)控功能
第4章 三葉木通AktFL1、AktAG1蛋白的亞細胞定位研究
    4.1 實驗材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 菌株與載體
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 AktFL1和AktAG1的基因ORF的克隆
        4.2.2 瞬時轉(zhuǎn)化煙草細胞
        4.2.3 瞬時轉(zhuǎn)化洋蔥內(nèi)表皮細胞
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 GFP融合蛋白表達載體的構(gòu)建
        4.3.2 AktFL1、AktAG1蛋白在煙草細胞中的轉(zhuǎn)化分析
        4.3.3 AktFL1、AktAG1蛋白在洋蔥細胞的轉(zhuǎn)化分析
    4.4 討論
第5章 三葉木通AktFL1、AktAG1蛋白的相互作用研究
    5.1 實驗材料
        5.1.1 植物材料
        5.1.2 菌株與載體
        5.1.3 主要試劑
        5.1.4 主要實驗儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 雙分子熒光互補(BiFC)表達載體的構(gòu)建
        5.2.2 壓力注射法瞬時轉(zhuǎn)化煙草細胞
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 BiFC表達載體的構(gòu)建
        5.3.2 AktFL1、AktAG1蛋白之間的相互作用
    5.4 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間的研究成果



本文編號：3742184