發(fā)布時間：2023-02-09 14:46

　　冬蟲夏草(Chinese Cordyceps)是我國一味名貴中草藥,是多種真菌共存共生、與蝙蝠蛾幼蟲尸體組成的菌蟲復合體。冬蟲夏草內(nèi)生真菌的分離、無性型的確定和人工發(fā)酵培養(yǎng)是冬蟲夏草的研究熱點之一。本文在分離和鑒定冬蟲夏草內(nèi)生真菌的基礎(chǔ)上,對內(nèi)生真菌生產(chǎn)和冬蟲夏草具有相似活性成分進行了分析,同時優(yōu)化了內(nèi)生真菌的培養(yǎng)基組成,該研究對于發(fā)掘新型藥用微生物資源、尋找冬蟲夏草替代品和保護冬蟲夏草種質(zhì)資源具有重要的意義。首先,利用常規(guī)的內(nèi)生真菌的分離方法,從冬蟲夏草中分離內(nèi)生真菌30多株,選取其中6株內(nèi)生真菌,根據(jù)其克隆的形態(tài)特征、產(chǎn)孢特性以及分子特征確定其分類地位。結(jié)果表明:分離的6株真菌分別屬于鐮刀菌屬(Fusarium spp.),毛霉屬(Mucor spp.),被孢霉屬(Mortierella spp.)三個屬。其次,在搖瓶內(nèi)對6個菌株進行液體培養(yǎng),用高效液相色譜法對其發(fā)酵菌液中與冬蟲夏草相關(guān)活性成分(包括尿苷、鳥苷、腺苷和蟲草素)進行分析。結(jié)果表明該6株真菌的發(fā)酵液中均能檢測到尿苷、鳥苷、腺苷和蟲草素等活性成分。通過對不同菌株產(chǎn)生活性成分的含量進行比較,發(fā)現(xiàn)鐮刀菌屬真菌NS2-B1產(chǎn)生...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 冬蟲夏草內(nèi)生真菌的研究概況
        1.1.1 基于可培養(yǎng)的方法分離內(nèi)生真菌的研究
        1.1.2 基于非培養(yǎng)的方法內(nèi)生真菌種群結(jié)構(gòu)的分析
    1.2 冬蟲夏草分子生物學的其它研究
        1.2.1 分子標記技術(shù)在冬蟲夏草研究中的應用
        1.2.2 DNA指紋圖譜技術(shù)在冬蟲夏草研究中的應用
    1.3 論文的目的與意義
第二章 冬蟲夏草內(nèi)生真菌的分離鑒定及活性成分的測定
    2.1 材料
    2.2 試劑與培養(yǎng)基
    2.3 主要儀器和設(shè)備
    2.4 實驗方法
        2.4.1 冬蟲夏草內(nèi)生真菌菌株的分離和純化
        2.4.2 冬蟲夏草內(nèi)生真菌的生長特性
        2.4.3 冬蟲夏草內(nèi)生真菌的形態(tài)學鑒定
        2.4.4 冬蟲夏草內(nèi)生真菌分子生物學鑒定
    2.5 實驗結(jié)果
        2.5.1 冬蟲夏草內(nèi)生真菌的形態(tài)學鑒定結(jié)果
        2.5.2 冬蟲夏草內(nèi)生真菌的生長速度
        2.5.3 冬蟲夏草內(nèi)生真菌的分子生物學鑒定結(jié)果
    2.6 討論
第三章 冬蟲夏草內(nèi)生真菌核苷成分的分析
    3.1 材料
    3.2 試劑與培養(yǎng)基
    3.3 主要儀器和設(shè)備
    3.4 實驗方法
        3.4.1 冬蟲夏草內(nèi)生菌樣品的制備
        3.4.2 冬蟲夏草與北蟲草樣品的制備
        3.4.3 冬蟲夏草內(nèi)生菌核苷成分高效液相測定方法的建立
    3.5 實驗結(jié)果
        3.5.1 菌種發(fā)酵培養(yǎng)
        3.5.2 高效液相色譜測定方法的建立
        3.5.3 冬蟲夏草、北蟲草及冬蟲夏草內(nèi)生菌中核苷含量
    3.6 討論
第四章 冬蟲夏草內(nèi)生真菌(鐮刀菌屬真菌NS2-B1和毛霉屬真菌NS2-Z)液體發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選
    4.1 材料
    4.2 試劑與培養(yǎng)基
    4.3 主要儀器和設(shè)備
    4.4 實驗方法
        4.4.1 菌絲的培養(yǎng)
        4.4.2 菌絲的收集
        4.4.3 培養(yǎng)基碳源與氮源的篩選
        4.4.4 正交試驗優(yōu)化復合碳氮源組合
        4.4.5 數(shù)據(jù)處理
    4.5 實驗結(jié)果
        4.5.1 冬蟲夏草內(nèi)生真菌培養(yǎng)基碳源與氮源的篩選結(jié)果
        4.5.2 冬蟲夏草內(nèi)生真菌中菌絲量篩選碳源、氮源結(jié)果
        4.5.3 冬蟲夏草內(nèi)生真菌中活性成分篩選碳、氮源結(jié)果
    4.6 討論
第五章 西藏冬蟲夏草宏轉(zhuǎn)錄組分析
    5.1 材料
    5.2 試劑與培養(yǎng)基
    5.3 主要儀器和設(shè)備
    5.4 實驗方法
        5.4.1 冬蟲夏草RNA抽提(組織)
        5.4.2 RNA瓊脂糖凝膠電泳的質(zhì)量檢測
        5.4.3 RNA文庫構(gòu)建
        5.4.4 數(shù)據(jù)處理
    5.5 實驗結(jié)果
        5.5.1 RNA質(zhì)量檢測
        5.5.2 轉(zhuǎn)錄本拼接及差異表達分析
        5.5.3 GOfact功能分析注釋
        5.5.4 KEGG Pathway分析
    5.6 討論
第六章 總結(jié)與展望
    6.1 全文總結(jié)
        6.1.1 冬蟲夏草內(nèi)生真菌的分離鑒定及核苷成分的分析
        6.1.2 冬蟲夏草鐮刀菌屬真菌NS2-B1和毛霉屬真菌NS2-Z液體發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選
        6.1.3 不同地理環(huán)境生長區(qū)域下冬蟲夏草宏轉(zhuǎn)錄組分析
    6.2 創(chuàng)新點
    6.3 研究展望
參考文獻
附錄
致謝
攻讀碩士學位期間已發(fā)表或錄用的論文



本文編號：3738911