本研究以蘭科幾種珍稀藥用植物（杜鵑蘭、金釵石斛、白及）為試驗(yàn)材料,研究其叢生芽發(fā)生的影響因素和誘導(dǎo)途徑,在成功建立了這幾種植物叢生芽化學(xué)誘導(dǎo)方法的基礎(chǔ)上,也對(duì)其叢生芽的轉(zhuǎn)基因誘導(dǎo)進(jìn)行了探索。主要研究結(jié)果如下:1、以杜鵑蘭種子無菌萌發(fā)的原球莖為試材,研究不同培養(yǎng)基、不同種類及濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、不同濃度活性炭及不同培養(yǎng)條件對(duì)杜鵑蘭原球莖增殖的影響。結(jié)果表明:以1/2MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+IBA 1.0 mg·L^-1+活性炭0.5 g·L^-1為增殖培養(yǎng)基,溫度15℃,光照強(qiáng)度2000 lx時(shí)有利于杜鵑蘭原球莖的增殖,增殖的原球莖呈叢生型且長(zhǎng)勢(shì)較好,40 d內(nèi)增殖率可達(dá)177.11%;以生長(zhǎng)勢(shì)好的增殖原球莖為試驗(yàn)材料,研究不同含量的大量元素、不同種類及濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、活性炭及正交優(yōu)化試驗(yàn)（TDZ、IAA、蔗糖、大量元素）對(duì)杜鵑蘭“芽叢”誘導(dǎo)增殖的影響。結(jié)果表明:1/4MS培養(yǎng)基附加TDZ 1.5 mg·L^-1+IAA 0.4 mg·L^-1+蔗糖30 g·L... 

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 蘭科植物概述
    2 蘭科植物的藥理作用
    3 蘭科植物的組織培養(yǎng)
        3.1 蘭科植物組織培養(yǎng)的研究進(jìn)展
        3.2 蘭科植物叢生芽的化學(xué)誘導(dǎo)研究現(xiàn)狀
    4 蘭科植物遺傳轉(zhuǎn)化研究現(xiàn)狀
    5 研究目的和意義
第二章 蘭科幾種珍稀藥用植物叢生芽的化學(xué)誘導(dǎo)研究
    第一節(jié) 杜鵑蘭“叢生芽”的化學(xué)誘導(dǎo)
        1 試驗(yàn)材料
        2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.1 杜鵑蘭原球莖的增殖條件
                2.1.1 培養(yǎng)基
                2.1.2 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)
                2.1.3 活性炭
                2.1.4 培養(yǎng)條件
            2.2 杜鵑蘭“芽叢”的化學(xué)誘導(dǎo)
                2.2.1 大量元素
                2.2.2 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)
                2.2.3 活性炭
                2.2.4 正交優(yōu)化試驗(yàn)
            2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析方法
        3 結(jié)果與分析
            3.1 培養(yǎng)條件對(duì)杜鵑蘭原球莖增殖的影響
                3.1.1 培養(yǎng)基組分對(duì)杜鵑蘭原球莖增殖的影響
                3.1.2 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)杜鵑蘭原球莖增殖的影響
                3.1.3 活性炭對(duì)杜鵑蘭原球莖增殖的影響
                3.1.4 光照強(qiáng)度和溫度對(duì)杜鵑蘭原球莖增殖的影響
            3.2 培養(yǎng)條件對(duì)杜鵑蘭“芽叢”誘導(dǎo)的影響
                3.2.1 大量元素對(duì)杜鵑蘭“芽叢”誘導(dǎo)的影響
                3.2.2 細(xì)胞分裂素對(duì)杜鵑蘭“芽叢”誘導(dǎo)的影響
                3.2.3 生長(zhǎng)素對(duì)杜鵑蘭“芽叢”誘導(dǎo)的影響
                3.2.4 活性炭對(duì)杜鵑蘭“芽叢”誘導(dǎo)的影響
                3.2.5 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、蔗糖及大量元素對(duì)杜鵑蘭“芽叢”誘導(dǎo)的影響
        4 討論
            4.1 原球莖增殖
            4.2 “芽叢”的化學(xué)誘導(dǎo)
    第二節(jié) 金釵石斛叢生芽的化學(xué)誘導(dǎo)
        1 試驗(yàn)材料
        2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.1 金釵石斛種子消毒與萌發(fā)
            2.2 金釵石斛愈傷組織的誘導(dǎo)
            2.3 金釵石斛叢生芽的誘導(dǎo)
            2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析方法
        3 結(jié)果與分析
            3.1 消毒時(shí)間和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)金釵石斛種子萌發(fā)的影響
            3.2 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)及活性炭對(duì)金釵石斛愈傷組織誘導(dǎo)的影響
            3.3 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)及活性炭對(duì)金釵石斛叢生芽誘導(dǎo)的影響
        4 討論
    第三節(jié) 白及叢生芽的化學(xué)誘導(dǎo)
        1 試驗(yàn)材料
        2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.1 白及種子的無菌萌發(fā)
            2.2 白及叢生芽的化學(xué)誘導(dǎo)
            2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析方法
        3 結(jié)果與分析
            3.1 NAA對(duì)白及種子萌發(fā)的影響
            3.2 6-BA對(duì)白及叢生芽誘導(dǎo)的影響
        4 討論
第三章 蘭科幾種珍稀藥用植物叢生芽的轉(zhuǎn)基因誘導(dǎo)研究
    第一節(jié) 材料與設(shè)備
        1 試驗(yàn)材料
            1.1 植物材料
            1.2 農(nóng)桿菌菌株與質(zhì)粒
        2 試劑與儀器
            2.1 主要生化試劑
            2.2 主要儀器
        3 常用培養(yǎng)基
            3.1 農(nóng)桿菌培養(yǎng)基
            3.2 植物培養(yǎng)基
    第二節(jié) 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        1 根癌農(nóng)桿菌的培養(yǎng)
        2 卡那霉素敏感性試驗(yàn)
        3 遺傳轉(zhuǎn)化方法
        4 不同因素對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響
            4.1 材料的生理狀態(tài)
            4.2 創(chuàng)傷方式
            4.3 菌液OD600值
            4.4 預(yù)培養(yǎng)時(shí)間
            4.5 共培養(yǎng)時(shí)間
            4.6 侵染時(shí)間
        5 GUS組織化學(xué)法檢測(cè)
        6 轉(zhuǎn)化植株的PCR檢測(cè)
            6.1 合成引物
            6.2 杜鵑蘭、金釵石斛和白及植株的DNA提取
            6.3 小量快速抽提法提取質(zhì)粒DNA
            6.4 PCR擴(kuò)增
        7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析方法
    第三節(jié) 結(jié)果與分析
        1 杜鵑蘭、金釵石斛和白及對(duì)Kan的敏感性
        2 不同因素對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響
            2.1 材料的生理狀態(tài)對(duì)杜鵑蘭、金釵石斛和白及GUS表達(dá)率的影響
            2.2 創(chuàng)傷方式對(duì)杜鵑蘭和金釵石斛GUS表達(dá)率的影響
            2.3 菌液OD600值對(duì)杜鵑蘭、金釵石斛和白及GUS表達(dá)率的影響
            2.4 預(yù)培養(yǎng)時(shí)間對(duì)杜鵑蘭、金釵石斛和白及GUS表達(dá)率的影響
            2.5 共培養(yǎng)時(shí)間對(duì)杜鵑蘭、金釵石斛和白及GUS表達(dá)率的影響
            2.6 侵染時(shí)間對(duì)杜鵑蘭、金釵石斛和白及GUS表達(dá)率的影響
        3 GUS組織化學(xué)檢測(cè)
        4 轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測(cè)
        5 討論
第四章 總結(jié)與展望
    1 總結(jié)
        1.1 杜鵑蘭“芽叢”的化學(xué)誘導(dǎo)
        1.2 金釵石斛叢生芽的化學(xué)誘導(dǎo)
        1.3 白及叢生芽的化學(xué)誘導(dǎo)
        1.4 蘭科幾種珍稀藥用植物叢生芽的轉(zhuǎn)基因誘導(dǎo)研究
    2 本研究的創(chuàng)新之處
    3 后續(xù)工作與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]霍山石斛組培培養(yǎng)基篩選[J]. 劉建美.  現(xiàn)代園藝. 2015(09)
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碩士論文
[1]稀土元素鑭、鈰對(duì)金線蘭離體培養(yǎng)的影響及機(jī)理初探[D]. 徐迎亞.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2016
[2]山慈菇（杜鵑蘭）快速繁殖技術(shù)優(yōu)化及鐵皮石斛葉cDNA PCR文庫(kù)的構(gòu)建[D]. 馮沛春.西南交通大學(xué) 2014
[3]鐵皮石斛NAC基因的遺傳轉(zhuǎn)化[D]. 石彩娟.西南交通大學(xué) 2013
[4]山慈菇（杜鵑蘭）快速繁殖技術(shù)體系的建立[D]. 廖婷婷.西南交通大學(xué) 2012
[5]農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)ipt基因創(chuàng)造半夏新種質(zhì)[D]. 王新穎.貴州大學(xué) 2009
[6]杜鵑蘭重要生理特性和生態(tài)適應(yīng)性研究[D]. 張麗霞.貴州大學(xué) 2008
[7]金釵石斛快速繁殖及其生物堿累積的研究[D]. 唐金剛.貴州師范大學(xué) 2005



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