發(fā)布時間：2022-12-08 01:07

　　近年來,全球變暖引發(fā)的區(qū)域性高溫是導(dǎo)致農(nóng)作物雄性不育的重要因素之一,并且嚴(yán)重威脅農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。研究表明GhCKI在響應(yīng)高溫導(dǎo)致棉花雄性不育方面具有重要功能,因此為了進(jìn)一步解析高溫脅迫導(dǎo)致棉花雄性不育的敗育機(jī)理,通過酵母雙雜篩選出與GhCKI互作的GhACBP4（acyl-CoA-binding protein 4）蛋白,并且從超表達(dá)GhCKI擬南芥花蕾和棉花H05（高溫敏感型）花藥的磷酸化蛋白質(zhì)組中篩選出3種ACBP4的磷酸化肽段。因此,本研究主要解析GhACBP4在花藥中的功能,主要結(jié)果如下:1、經(jīng)過序列分析發(fā)現(xiàn),在陸地棉基因組中GhACBP4存在6個同源基因。組織表達(dá)模式分析表明Gh_A13G0893/Gh_D13G1134在花藥中優(yōu)勢表達(dá)。然而轉(zhuǎn)基因材料proGh_A13G0893::GUS的組織表達(dá)模式表明,該基因在花藥、胚珠和萌發(fā)后的種子中高量表達(dá)。而且,高溫誘導(dǎo)表達(dá)模式分析表明,在花藥開裂期（ADS,＞24mm花蕾）GhACBP4同源基因總體的表達(dá)量受高溫誘導(dǎo)后可能會下調(diào)表達(dá)。2、綜合比較6個同源基因的表達(dá)水平和3種磷... 

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 文獻(xiàn)綜述
    前言
    1.1 植物雄性生殖器官的發(fā)育
        1.1.1 花藥發(fā)育的細(xì)胞學(xué)過程
        1.1.2 花藥發(fā)育的分子機(jī)制
        1.1.3 花粉壁發(fā)育的過程
    1.2 高溫脅迫對雄性生殖器官的影響
        1.2.1 高溫脅迫下雄性生殖器官的表現(xiàn)
        1.2.2 高溫脅迫導(dǎo)致雄性敗育的機(jī)理研究
    1.3 植物ACBP研究概述
    1.4 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 載體和菌株
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 提取棉花RNA操作
        2.2.2 RNA反轉(zhuǎn)操作
        2.2.3 RT-PCR和qRT-PCR
        2.2.4 TTC花粉活性染色液
        2.2.5 透射電鏡
        2.2.6 原核蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 雙向電泳
        2.2.8 GUS染色分析
        2.2.9 花藥石蠟切片的制作
        2.2.10 原位雜交
        2.2.11 酵母雙雜
        2.2.12 雙分子熒光互補(bǔ)和亞細(xì)胞定位
        2.2.13 雙分子熒光素酶互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)
        2.2.14 游離脂肪酸含量測定
        2.2.15 花藥脂質(zhì)提取和薄層層析
        2.2.16 淀粉含量測定操作
        2.2.17 磷酸化反應(yīng)和去磷酸化反應(yīng)
        2.2.18 數(shù)據(jù)處理
3 結(jié)果與分析
    3.1 GhACBP4序列分析
    3.2 GhACBP4的組織表達(dá)分析
    3.3 GhACBP4的高溫誘導(dǎo)表達(dá)分析
    3.4 GhACBP4轉(zhuǎn)基因棉花表型鑒定和分子檢測
    3.5 脂肪酸和脂質(zhì)含量檢測
    3.6 GhACBP4與GhCKI的蛋白互作研究
    3.7 原核表達(dá)GhACBP4蛋白
4 討論
    4.1 GhACBP4蛋白可能參與過氧化物酶體脂質(zhì)代謝
    4.2 RNA干涉GhACBP4導(dǎo)致棉花花藥敗育的機(jī)理
    4.3 超表達(dá)GhACBP4導(dǎo)致棉花花藥敗育的機(jī)理
    4.4 高溫脅迫下GhACBP4導(dǎo)致棉花花藥敗育的機(jī)理
5 后續(xù)展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]DEX1, a plasma membrane-localized protein, functions in microspore development by affecting CalS5 expression in Arabidopsis thaliana[J]. MA LiJuan,YANG ZhongNan,ZHANG Sen.  Chinese Science Bulletin. 2013(23)
[2]小氣候與棉花敗育的關(guān)系[J]. 金桂紅.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 1985(01)

博士論文
[1]高溫脅迫下棉花花藥發(fā)育表達(dá)譜分析及GhCKI基因功能鑒定[D]. 閔玲.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號：3713235