發(fā)布時(shí)間：2022-11-06 17:20

　　桑黃（Sanghuangporus baumii）是一種十分珍貴的大型藥用真菌,在我國有著悠久的藥用歷史,具有抗腫瘤、保護(hù)肝臟、降血糖、治療炎癥、抗衰老及增強(qiáng)機(jī)體免疫力等多種功效。然而目前野生桑黃資源逐漸枯竭,人工栽培桑黃仍處于起步階段,尚未實(shí)現(xiàn)大規(guī)模工廠化生產(chǎn),導(dǎo)致了桑黃的藥用價(jià)值不能得到充分利用。桑黃三萜是桑黃的主要藥效成分,由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜,提取分離難度大,妨礙了對(duì)其進(jìn)一步開發(fā)利用。三萜生物合成關(guān)鍵酶基因的鑒定有助于從分子水平揭示其合成機(jī)制,為今后人工合成三萜化合物奠定理論基礎(chǔ),但目前對(duì)桑黃三萜的生物合成途徑仍缺少系統(tǒng)的研究。基于此,本課題對(duì)藥用真菌桑黃轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行深入分析,挖掘可能參與桑黃三萜生物合成途徑的關(guān)鍵酶基因,并對(duì)部分候選基因進(jìn)行了克隆和表達(dá)分析,為進(jìn)一步闡明桑黃三萜生物合成機(jī)制,以及今后利用基因工程手段改良桑黃進(jìn)而提高其藥用價(jià)值奠定了基礎(chǔ)。本文的主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下:1、桑黃三萜生物合成途徑推測(cè)與候選基因挖掘在桑黃轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中,有94條Unigenes（約1.08%）被注釋為參與萜類的生物合成相關(guān)的3條代謝通路中。進(jìn)一步,本研究基于已鑒定基因的同源性比對(duì)來深入挖... 

【文章頁數(shù)】：125 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 桑黃的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 桑黃的種類
        1.1.2 桑黃的藥理活性作用
        1.1.3 桑黃的主要藥用成分
        1.1.4 桑黃的人工栽培現(xiàn)狀
        1.1.5 桑黃分子生物學(xué)方面的研究進(jìn)展
        1.1.6 桑黃的資源價(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值與發(fā)展前景
    1.2 藥用植物三萜化合物的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 三萜結(jié)構(gòu)類型及合成途徑
        1.2.2 MVA途徑中關(guān)鍵酶的研究
        1.2.3 三萜途徑中細(xì)胞色素P450(CYP450)研究進(jìn)展
    1.3 本研究的目的意義
2 桑黃三萜生物合成關(guān)鍵酶基因的挖掘
    2.1 材料與方法
        2.1.1 基因信息來源
        2.1.2 桑黃三萜合成關(guān)鍵酶基因的挖掘
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 KEGG注釋中與萜類合成相關(guān)的代謝通路
        2.2.2 桑黃三萜骨架合成基因的挖掘
        2.2.3 參與桑黃三萜合成的下游基因搜索
    2.3 討論
    2.4 本章小結(jié)
3 桑黃三萜合成關(guān)鍵酶基因在不同發(fā)育階段的表達(dá)特性分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 桑黃子實(shí)體人工栽培
        3.2.2 桑黃不同發(fā)育階段總RNA的提取及檢測(cè)
        3.2.3 桑黃三萜合成關(guān)鍵酶基因在不同發(fā)育階段的表達(dá)分析
    3.3 討論
    3.4 本章小結(jié)
4 茉莉酸甲酯對(duì)桑黃三萜生物合成的影響
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        4.2.2 不同濃度MeJA對(duì)菌絲體三萜含量的影響
        4.2.3 不同濃度MeJA誘導(dǎo)條件下基因轉(zhuǎn)錄水平變化
        4.2.4 不同時(shí)間MeJA誘導(dǎo)條件下基因轉(zhuǎn)錄水平變化
    4.3 討論
    4.4 本章小結(jié)
5 桑黃三萜合成關(guān)鍵酶基因HMGS和SE的克隆與分析
    5.1 材料與方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 試驗(yàn)方法
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 總RNA的提取及檢測(cè)
        5.2.2 HMGS基因的克隆
        5.2.3 HMGS基因的生物信息學(xué)分析
        5.2.4 SE基因的克隆
        5.2.5 SE基因的生物信息學(xué)分析
    5.3 討論
    5.4 本章小結(jié)
6 桑黃SE基因的原核表達(dá)
    6.1 材料與方法
        6.1.1 材料
        6.1.2 試驗(yàn)方法
    6.2 結(jié)果與分析
        6.2.1 重組質(zhì)粒pMD18-T-SE的獲得
        6.2.2 桑黃SE基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        6.2.3 桑黃SE基因原核表達(dá)載體的誘導(dǎo)表達(dá)
    6.3 討論
    6.4 本章小結(jié)
7 桑黃SE基因過表達(dá)載體的構(gòu)建
    7.1 材料與方法
        7.1.1 材料
        7.1.2 方法
    7.2 結(jié)果與分析
        7.2.1 香菇gpd啟動(dòng)子克隆
        7.2.2 重組質(zhì)粒pCAMBIA 1301-gpd的檢測(cè)
        7.2.3 重組質(zhì)粒pCAMBIA 1301-gpd-gpd的檢測(cè)
        7.2.4 過表達(dá)載體pCAMBIA 1301-gpd-gpd-SE的檢測(cè)
    7.3 討論
    7.4 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3703905