WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族是一類重要的基因家族,可在轉(zhuǎn)錄水平通過調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)翻譯,參與植物對(duì)非生物脅迫的應(yīng)答調(diào)控。本研究立足六倍體栽培種小麥基因組數(shù)據(jù)庫,基于Blast等生物信息學(xué)手段分析篩選獲得一批小麥WRKY轉(zhuǎn)錄因子,對(duì)所篩選的小麥WRKY轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合擬南芥抗非生物脅迫WRKY家族成員做進(jìn)化分析,篩選獲得123條與六倍體小麥全長(zhǎng)WRKY轉(zhuǎn)錄因子序列。TaWRKY146被發(fā)現(xiàn)在滲透脅迫下小麥組織中的表達(dá)量顯著升高。TaWRKY146的過表達(dá)植株能顯著提高植物的抗旱性。研究所獲得結(jié)果總結(jié)如下。1以擬南芥,烏拉爾圖和山羊草的WRKY轉(zhuǎn)錄因子為模板,通過Blast序列比對(duì)分析,獲得818條小麥WRKY相似序列。將這些相似序列經(jīng)SMART和PFAM平臺(tái)分析,最終獲得123條具有全長(zhǎng)開放閱讀框的小麥WRKY轉(zhuǎn)錄因子。將這些序列與擬南芥和水稻的抗非生物脅迫WRKY轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行Blast比對(duì)分析,挑選獲得18條與非生物脅迫相關(guān)度較高的小麥WRKY轉(zhuǎn)錄因子,并做進(jìn)一步的研究。2將所獲得的六倍體小麥WRKY保守結(jié)構(gòu)域序列結(jié)合擬南芥的WRKY序列,利用ClastalW進(jìn)行序列比對(duì),MEGA 5.10軟件... 

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的起源
    1.2 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與分類
    1.3 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的生物學(xué)功能
        1.3.1 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的組成型表達(dá)調(diào)控
        1.3.2 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的誘導(dǎo)型表達(dá)調(diào)控
    1.4 小麥WRKY的研究進(jìn)展
    1.5 本課題的研究?jī)?nèi)容與意義
    1.6 本課題的技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 水培小麥的脅迫處理與取樣
        2.1.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗旱驗(yàn)證
    2.2 研究方法
        2.2.1 本研究相關(guān)應(yīng)用網(wǎng)站和軟件
        2.2.2 小麥總RNA的提取
        2.2.3 RNA的反轉(zhuǎn)錄
        2.2.4 熒光定量PCR
        2.2.5 擬南芥DNA的提取
        2.2.6 小麥抗非生物脅迫相關(guān)WRKY轉(zhuǎn)錄因子的篩選
        2.2.7 六倍體小麥WRKY轉(zhuǎn)錄因子的進(jìn)化分析
        2.2.8 小麥WRKY轉(zhuǎn)錄因子的克隆
        2.2.9 氣孔的掃描電鏡觀察
3 結(jié)果與分析
    3.1 六倍體小麥WRKY轉(zhuǎn)錄因子的生物信息學(xué)篩選與分析
        3.1.1 六倍體小麥WRKY轉(zhuǎn)錄因子的篩選
        3.1.2 六倍體小麥WRKY轉(zhuǎn)錄因子的的進(jìn)化分析
        3.1.3 六倍體小麥WRKY基因復(fù)制分析
        3.1.4 六倍體小麥WRKY轉(zhuǎn)錄因子在不同組織部位的表達(dá)量分析
        3.1.5 六倍體小麥抗非生物脅迫WRKY轉(zhuǎn)錄因子的篩選
    3.2 非生物脅迫相關(guān)WRKY轉(zhuǎn)錄因子在不同脅迫下的表達(dá)模式分析
    3.3 ABA和H2O2處理下Traes_7DL_A9EF00572表達(dá)模式分析
    3.4 Traes_7DL_A9EF00572序列克隆
    3.5 擬南芥過表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系的功能驗(yàn)證分析
        3.5.1 過表達(dá)擬南芥株系的功能驗(yàn)證
        3.5.2 過表達(dá)擬南芥干旱脅迫下的表型分析
        3.5.3 干旱脅迫下過表達(dá)植株理化指標(biāo)分析
        3.5.4 干旱脅迫下過表達(dá)株系擬南芥的蒸騰速率，氣孔導(dǎo)度分析
        3.5.5 擬南芥過表達(dá)株系的氣孔分析
4 討論
    4.1 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的生物信息學(xué)篩選
    4.2 小麥和擬南芥WRKY轉(zhuǎn)錄因子的進(jìn)化分析
    4.3 不同脅迫下TaWRKY146的表達(dá)模式分析
    4.4 TaWRKY146的過表達(dá)擬南芥植株分析
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
附錄A 相關(guān)所用引物列表
附錄B 培養(yǎng)基的制備
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文目錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]小麥鹽誘導(dǎo)表達(dá)TaWRKY79、TaWRKY80轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及功能分析[D]. 田延臣.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]平邑甜茶MhWRKY15基因的克隆及表達(dá)分析[D]. 孫曉莉.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[4]轉(zhuǎn)錄因子AtMYB13抑制擬南芥防衛(wèi)反應(yīng)的研究[D]. 徐玨.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3667801