發(fā)布時(shí)間：2022-07-09 16:30

　　棉花屬于錦葵科棉屬中的一個(gè)具有種子表皮毛（纖維）的異源四倍體植物種,是一類重要的經(jīng)濟(jì)作物。棉纖維是紡織工業(yè)的重要原料,它是由胚珠的表皮細(xì)胞分化形成的一類單細(xì)胞。棉纖維細(xì)胞發(fā)育需要經(jīng)歷四個(gè)不同的時(shí)期:起始、伸長(zhǎng)、次生細(xì)胞壁加厚以及成熟期。細(xì)胞壁是紡織工業(yè)中鑒定纖維品質(zhì)的重要參數(shù),因此研究棉花纖維的細(xì)胞壁對(duì)于紡織工業(yè)的發(fā)展顯得尤為重要。棉纖維的細(xì)胞壁主要由纖維素、半纖維素、木質(zhì)素以及糖蛋白組成,并且細(xì)胞壁的組分隨著棉纖維發(fā)育的進(jìn)程而變化。其中,阿拉伯半乳聚糖（Arabinogalactanproteins,AGPs）是棉纖維細(xì)胞壁糖蛋白的一種重要組分,該類蛋白在棉纖維的發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用,影響棉纖維的長(zhǎng)絨以及短絨的發(fā)育。這類蛋白是高度糖基化蛋白,首先是氨基酸主鏈上的脯氨酸被脯氨酸羥化酶（prolyl-4-hydroxylases,P4Hs）羥基化,隨后糖基轉(zhuǎn)移酶（Glycosyltransferases,GalTs）將羥脯氨酸糖基化。我們?cè)谇懊娴难芯恐欣酶彼崃u化酶的抑制劑處理棉花離體胚,發(fā)現(xiàn)該酶活性被抑制后,棉纖維伸長(zhǎng)發(fā)育也被抑制,這表明該酶可能涉及到棉纖維伸長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控過程。為深... 

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
一、引言
    1.1 植物細(xì)胞壁
        1.1.1 纖維素
        1.1.2 半纖維素
        1.1.3 果膠
    1.2 阿拉伯半乳聚糖糖蛋白(AGP)
        1.2.1 AGP結(jié)構(gòu)
        1.2.2 AGPs生物合成
        1.2.3 AGP生物學(xué)功能
    1.3 脯氨酸羥化酶(P4Hs)
        1.3.1 P4H分子結(jié)構(gòu)
        1.3.2 P4H生物學(xué)功能
    1.4 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)
        1.4.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)的發(fā)展
        1.4.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)運(yùn)用
    1.5 棉花纖維發(fā)育
    1.6 立題依據(jù)與意義
二、實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)菌種
    2.2 載體、試劑與工具酶
    2.3 常用緩沖液與Buffer
    2.4 常用培養(yǎng)基
    2.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.6 實(shí)驗(yàn)方法
        2.6.1 棉花基因組DNA提取(高鹽低滲法)
        2.6.2 棉花纖維RNA提取與消化
        2.6.3 棉花纖維RNA逆轉(zhuǎn)錄
        2.6.4 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)表達(dá)量
        2.6.5 β-Yariv制備
        2.6.6 棉花纖維AGPs提取與Dot blot分析
        2.6.7 棉花纖維AGPs定量分析
        2.6.8 DH5α感受態(tài)制備
        2.6.9 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞
        2.6.10 酵母感受態(tài)制備
        2.6.11 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細(xì)胞
        2.6.12 10 dpa棉花纖維石蠟切片
        2.6.13 石蠟切片脫蠟
        2.6.14 載體構(gòu)建
        2.6.15 酵母雙雜交檢測(cè)
        2.6.16 目的蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 GhP4H2轉(zhuǎn)基因棉花愈傷組織的繼代培養(yǎng)及植株再生
    3.2 GhP4H2轉(zhuǎn)基因棉花植株的鑒定
        3.2.1 GhP4H2轉(zhuǎn)基因棉花T1代陽(yáng)性植株鑒定
        3.2.2 GhP4H2轉(zhuǎn)基因棉花T2代陽(yáng)性植株鑒定
        3.2.3 GhP4H2轉(zhuǎn)基因棉花T3代陽(yáng)性植株鑒定
    3.3 轉(zhuǎn)基因棉花纖維中GhP4H2表達(dá)分析
        3.3.1 GhP4H2轉(zhuǎn)基因棉花T1代表達(dá)量變化分析
        3.3.2 GhP4H2轉(zhuǎn)基因棉花T2代表達(dá)量變化分析
        3.3.3 GhP4H2轉(zhuǎn)基因T3代表達(dá)量鑒定
    3.4 GhP4H2轉(zhuǎn)基因棉花成熟纖維表型分析
    3.5 GhP4H2轉(zhuǎn)基因棉花纖維中AGP含量分析
        3.5.1 GhP4H2轉(zhuǎn)基因棉花1Odpa纖維AGP含量的定量分析
        3.5.2 GhP4H2轉(zhuǎn)基因棉花纖維AGP的糖鏈分析
    3.6 GhP4H2轉(zhuǎn)基因棉花纖維細(xì)胞的切片觀察
    3.7 GhP4H2轉(zhuǎn)基因棉花纖維的轉(zhuǎn)錄組分析
        3.7.1 GhP4H2參與棉花纖維代謝過程分析
        3.7.2 GhP4H2參與棉花纖維發(fā)育的調(diào)控通路(pathway)分析
        3.7.3 GhP4H2參與調(diào)控細(xì)胞壁基因篩選
        3.7.4 細(xì)胞壁合成的差異基因的表達(dá)驗(yàn)證
        3.7.5 糖基轉(zhuǎn)移酶基因(GhGαlT)的表達(dá)檢測(cè)
    3.8 酵母雙雜交分析GhP4Hs間相互作用
        3.8.1 目的基因的篩選
        3.8.2 相關(guān)基因載體的構(gòu)建
        3.8.3 酵母雙雜檢測(cè)GhP4Hs間相互作用
    3.9 GhP4H2和GhP4H3蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
        3.9.1 GhP4H2和GhP4H3蛋白表達(dá)載體構(gòu)建
        3.9.2 GhP4H2和GhP4H3蛋白誘導(dǎo)表達(dá)檢測(cè)
四、討論
    4.1 GhP4H2參與調(diào)控棉花纖維的發(fā)育
    4.2 GhP4H2可能參與棉花纖維細(xì)胞壁AGP合成
    4.3 GhP4H2能夠影響棉花纖維細(xì)胞壁合成相關(guān)基因的表達(dá)
    4.4 GhP4H2參與棉纖維發(fā)育相關(guān)的調(diào)控代謝通路
參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表的論文
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]轉(zhuǎn)錄組與RNA-Seq技術(shù)[J]. 張春蘭,秦孜娟,王桂芝,紀(jì)志賓,王建民.  生物技術(shù)通報(bào). 2012(12)
[2]新一代測(cè)序技術(shù)在植物轉(zhuǎn)錄組研究中的應(yīng)用[J]. 梁燁,陳雙燕,劉公社.  遺傳. 2011(12)
[3]植物半纖維素結(jié)構(gòu)研究進(jìn)展[J]. 余紫蘋,彭紅,林妲,阮榕生,王娜,胡錚,劉玉環(huán),張錦勝.  高分子通報(bào). 2011(06)
[4]基于高通量測(cè)序454 GS FLX的丹參轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[J]. 李瀅,孫超,羅紅梅,李西文,牛云云,陳士林.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2010(04)
[5]一類新的編碼PRPs基因的分離及其在棉花纖維等組織細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 許文亮,黃耿青,王秀蘭,汪虹,李學(xué)寶.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2007(05)
[6]棉花纖維發(fā)育的分子研究進(jìn)展[J]. 陳良兵,李永起.  分子植物育種. 2004(01)

博士論文
[1]棉花（Gossypium hirsutum）GhGalT1和GhDi19-1/-2基因的生物學(xué)功能及調(diào)控研究[D]. 秦麗霞.華中師范大學(xué) 2016

碩士論文
[1]棉花（Gossypium hirsutum）藍(lán)銅蛋白BCP4在纖維細(xì)胞伸長(zhǎng)中的功能研究[D]. 李瑩.華中師范大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3657445