在植物中,磷脂酰乙醇胺結合蛋白（phosphatiylethanolamine-binding proteins,PEBP）家族被劃分為以下三類,即為FLOWERING LOCUS T（FT）-like、TERMINAL FLOWER1（TFL1）-like和MOTHER OF FT AND TFL1（MFT）-like。FT-like調節(jié)分生組織有限的生長和TFL1-like調節(jié)分生組織無限的生長,并最終影響開花時間和植株的構型。MFT通常被認為是FT/TFL1的祖先,但其功能尚不清楚。最近研究揭示了MFT同源基因可能在調控植物開花和種子萌發(fā)等方面具有十分重要的作用,MFT基因缺失突變體（mft-2）的開花表型不受影響,但對ABA敏感,其萌發(fā)率較低;而四倍體陸地棉中MFT-like基因的功能還不是很清楚。目的:通過對GhMFT-like基因的生物信息學和表達模式的分析以及轉基因擬南芥和棉花的研究,初步確定GhMFT-like基因在調控棉花胚珠發(fā)育和種子萌發(fā)中的作用。方法:采用RT-PCR技術進行GhMFT-like基因的克隆;構建GhMFT-like-GFP融合載體、BD-GhMFT... 

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略表
引言
第一章 文獻綜述
    1.1 棉花PEBP家族基因的研究進展
    1.2 MFT-like的研究進展
        1.2.1 MFT-like概述
        1.2.2 MFT-like的功能
        1.2.3 MFT-like的作用的分子機制
        1.2.4 MFT-like啟動子的研究進展
    1.3 棉花功能基因組的研究進展
    1.4 基因編輯技術在棉花中的應用
        1.4.1 基因編輯技術概述
        1.4.2 基因編輯技術在棉花中應用
    1.5 本課題的研究意義
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 載體和菌種
        2.1.3 試劑
    2.2 方法
        2.2.1 陸地棉PEBP家族基因成員的查找與生物信息學分析
        2.2.2 棉花和擬南芥RNA的提取
        2.2.3 cDNA第1 鏈的合成
        2.2.4 CTAB法提取植物總DNA
        2.2.5 陸地棉MFT-like基因的克隆
        2.2.6 Gh MFT-like基因啟動子的查找和序列分析
        2.2.7 Gh MFT2 基因啟動子的克隆
        2.2.8 棉花種子的萌發(fā)實驗
        2.2.9 實時熒光定量PCR技術分析陸地棉MFT-like基因的表達情況
        2.2.10 植物表達載體的構建
        2.2.11 農桿菌介導的擬南芥遺傳轉化
        2.2.12 農桿菌介導的棉花遺傳轉化
        2.2.13 GhMFT-like蛋白的亞細胞定位
        2.2.14 酵母感受態(tài)的制備及轉化
第三章 結果與分析
    3.1 陸地棉MFT-like同源基因的克隆和生物信息學分析
        3.1.1 棉花PEBP家族基因的分析
        3.1.2 Gh MFT1和GhMFT2 基因的克隆和序列分析
        3.1.3 Gh MFT-like啟動子的克隆與分析
        3.1.4 Gh MFT-like基因啟動子順式作用元件預測
    3.2 GhMFT-like基因的表達分析
        3.2.1 Gh MFT-like基因在不同組織中的表達模式
        3.2.2 Gh MFT-like基因在胚珠和纖維不同發(fā)育時期的表達模式
        3.2.3 Gh MFT-like基因的在不同生長發(fā)育時期的葉片中的表達模式
        3.2.4 Gh MFT-like基因在種子萌發(fā)的不同階段的表達分析
        3.2.5 Gh MFT-like基因在種子不同激素和NaCl處理下的表達分析
    3.3 GhMFT-like蛋白的亞細胞定位以及與GhFD蛋白的互作
        3.3.1 GhMFT-like蛋白的亞細胞定位
        3.3.2 酵母雙雜交BD-GhMFT-like載體的構建及毒性檢測
        3.3.3 GhMFT1和Gh MFT2 蛋白與GhFD蛋白的互作
    3.4 擬南芥的遺傳轉化及轉基因擬南芥的表型分析
        3.4.1 植物過量表達載體的構建及農桿菌轉化
        3.4.2 轉基因擬南芥的鑒定
        3.4.3 轉基因擬南芥的表型分析
        3.4.4 轉基因擬南芥中ABA和 GA信號通路相關基因的表達分析
        3.4.5 轉基因擬南芥在ABA和 NaCl處理下幼苗的生長狀況
    3.5 棉花的遺傳轉化及轉基因棉花的表型分析
        3.5.1 植物表達載體的構建及農桿菌轉化
        3.5.2 Gh MFT-like的棉花遺傳轉化
        3.5.3 基于CRISPR/Cas9 技術的GhMFT-like棉花遺傳轉化
        3.5.4 轉基因棉花表型的分析
第四章 討論與結論
    4.1 討論
        4.1.1 陸地棉MFT-like亞家族成員的進化分析
        4.1.2 Gh MFT-like參與棉花種子的發(fā)育和萌發(fā)
        4.1.3 GhMFT-like在細胞中的定位及與GhFD的互作
        4.1.4 異源表達GhMFT-like抑制擬南芥的萌發(fā)
    4.2 結論
第五章 創(chuàng)新點與展望
    5.1 創(chuàng)新點
    5.2 展望
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介
導師評閱表


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Molecular cloning and functional analysis of the FLOWERING LOCUS T（FT） homolog Gh FT1 from Gossypium hirsutum[J]. Danli Guo,Chao Li,Rui Dong,Xiaobo Li,Xiangwen Xiao,Xianzhong Huang.  Journal of Integrative Plant Biology. 2015(06)

碩士論文
[1]花生AhMFT基因在種子休眠中的作用研究[D]. 葛姍姍.山東師范大學 2015
[2]花生MFT基因的克隆與功能驗證[D]. 朱巖.山東師范大學 2013



本文編號：3648099