大豆是世界范圍內(nèi)重要的糧食作物和經(jīng)濟(jì)作物,其經(jīng)濟(jì)和營養(yǎng)價(jià)值僅次于禾本科植物,其根系能夠與土壤中的根瘤菌共生固氮從而提高土壤肥力。豆科生長(zhǎng)在世界上15%的可耕地面積,提供人類大約33%的膳食氮,在發(fā)展中國家甚至達(dá)到60%。目前,豆科植物作為生物燃料的來源也越來越受到人類的關(guān)注。盡管豆科植物如此重要,但我們對(duì)它的許多獨(dú)特性狀的了解仍然是非常有限的,比如共生固氮和相關(guān)過程的演變。最近,我們?cè)趯?duì)大豆WRKY家族的分析過程中發(fā)現(xiàn)了豆科植物特有的一個(gè)EXO70亞類蛋白（GmExo70J）,其部分GmExo70J蛋白通過其N端的跨膜域定位在高爾基體上。此外,一些GmExo70J基因的沉默會(huì)導(dǎo)致大豆葉片早衰以及根瘤數(shù)量的減少。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)攜帶有GmExo70J啟動(dòng)子-GUS載體的轉(zhuǎn)基因擬南芥進(jìn)行GUS染色,進(jìn)一步分析了這12個(gè)GmExo70J基因的組織表達(dá)模式。此外,還檢測(cè)了部分?jǐn)y帶GmExo70J啟動(dòng)子-GUS載體的轉(zhuǎn)基因擬南芥對(duì)暗脅迫和熱脅迫的響應(yīng)。然后,對(duì)GmExo70J7和GmExo70J8的啟動(dòng)子進(jìn)行了解析。最后,分析了GmExo70J7和GmExo70J9基因?qū)Ω鼍捻憫?yīng)以及對(duì)GmExo... 

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
縮略詞表
1. 引言
    1.1 胞泌復(fù)合體的發(fā)現(xiàn)及其工作原理
    1.2 植物中EXO70蛋白的研究進(jìn)展
    1.3 大豆GmExo70J蛋白的發(fā)現(xiàn)與研究
2. 材料與方法
    2.1 大豆GmExo70J啟動(dòng)子的克隆及其GUS表達(dá)
        2.1.1 GmExo70J啟動(dòng)子-GUS重組載體的構(gòu)建
        2.1.2 重組載體轉(zhuǎn)化擬南芥
        2.1.3 GmExo70J啟動(dòng)子在擬南芥的GUS表達(dá)
        2.1.4 GmExo70J啟動(dòng)子在大豆發(fā)根中的GUS表達(dá)
    2.2 大豆GmExo70J基因全長(zhǎng)的克隆及其在擬南芥中的表達(dá)
        2.2.1 GmExo70J基因全長(zhǎng)的克隆及其轉(zhuǎn)化擬南芥
        2.2.2 擬南芥種子蛋白的提取
        2.2.3 BCA蛋白質(zhì)定量確定蛋白濃度
        2.2.4 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)實(shí)驗(yàn)原理和操作步驟
    2.3 GmExo70J對(duì)熱脅迫和暗脅迫的響應(yīng)
        2.3.1 熱脅迫和暗脅迫處理
        2.3.2 總RNA的提取及cDNA合成
        2.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)
    2.4 GmExo70J7和GmExo70J8的啟動(dòng)子解析
        2.4.1 GmExo70J7的啟動(dòng)子解析
        2.4.2 GmExo70J8的啟動(dòng)子解析
    2.5 GmExo70J7和GmExo70J9與大豆結(jié)瘤的關(guān)系
        2.5.1 GmExo70J7和GmExo70J9對(duì)根瘤菌侵染的響應(yīng)
        2.5.2 GmExo70J7和GmExo70J9與大豆結(jié)瘤素的關(guān)系
3. 結(jié)果與分析
    3.1 大豆GmExo70J啟動(dòng)子的克隆及其GUS表達(dá)
        3.1.1 GmExo70J基因在幼苗期的轉(zhuǎn)基因擬南芥中的GUS表達(dá)
        3.1.2 GmExo70J基因在7周齡的轉(zhuǎn)基因擬南芥中的GUS表達(dá)
        3.1.3 GmExo70J基因在開花期轉(zhuǎn)基因擬南芥中的GUS表達(dá)
        3.1.4 GmExo70J基因在轉(zhuǎn)基因大豆發(fā)根中的GUS表達(dá)
    3.2 大豆GmExo70J基因全長(zhǎng)的克隆及其在擬南芥中的表達(dá)
    3.3 GmExo70J轉(zhuǎn)基因擬南芥對(duì)暗脅迫和熱脅迫的響應(yīng)
        3.3.1 GmExo70J對(duì)暗脅迫的響應(yīng)
        3.3.2 GmExo70J對(duì)熱脅迫的響應(yīng)
    3.4 GmExo70J7和GmExo70J8的啟動(dòng)子解析
        3.4.1 GmExo70J7的啟動(dòng)子解析
        3.4.2 GmExo70J8的啟動(dòng)子解析
    3.5 GmExo70J7和GmExo70J9與大豆結(jié)瘤的關(guān)系
        3.5.1 GmExo70J7和GmExo70J9對(duì)根瘤菌侵染的響應(yīng)
        3.5.2 GmExo70J7和GmExo70J9與大豆結(jié)瘤素的關(guān)系
4. 討論
    4.1 GmExo70J在擬南芥中的組織特異性表達(dá)
    4.2 GmExo70J基因?qū)Ψ巧锩{迫的響應(yīng)
    4.3 GmExo70J蛋白與大豆結(jié)瘤的關(guān)系
5. 參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物細(xì)胞自噬研究進(jìn)展[J]. 王燕,劉玉樂.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2010(05)

博士論文
[1]活性氧、激素互作、自噬和轉(zhuǎn)錄因子在番茄和擬南芥逆境脅迫響應(yīng)中的作用機(jī)理和調(diào)控[D]. 周杰.浙江大學(xué) 2014

碩士論文
[1]大豆胞囊線蟲誘導(dǎo)相關(guān)啟動(dòng)子的篩選及大豆GmWRP1和GmExo70J蛋白功能鑒定[D]. 王澤.浙江大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3648075