小麥?zhǔn)鞘澜缟现饕募Z食作物。在國際貿(mào)易中,小麥的交易量占很大比重。小麥?zhǔn)斋@前,受季風(fēng)氣候的影響,會(huì)發(fā)生穗上發(fā)芽的現(xiàn)象。小麥籽粒發(fā)芽,使淀粉降解,嚴(yán)重影響小麥的品質(zhì)。發(fā)芽的小麥籽粒,α-淀粉酶的活性增強(qiáng),負(fù)向影響小麥降落值。降落值大小是小麥等級(jí)區(qū)分、交易價(jià)格和儲(chǔ)存方式的重要依據(jù)。本論文主要利用NCBI網(wǎng)站中α-淀粉酶基因以及EST序列,嘗試開發(fā)與小麥降落值相關(guān)的分子標(biāo)記。主要結(jié)果如下:1)按照AACCI/No.56-81.03（1972）國際標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定小麥降落值。測(cè)定406份普通小麥材料的降落值,方差分析結(jié)果表明,該群體小麥降落值在不同品種間存在極顯著差異,重復(fù)間差異不顯著,可用于分子標(biāo)記的開發(fā)。2)將α-淀粉酶基因α-AMY1（NCBI基因登陸號(hào):KJ470678）、α-AMY2（KX449614）和α-AMY3（M16991）及EST（cv065403）進(jìn)行序列比對(duì),共設(shè)計(jì)出360對(duì)TRAP引物。利用降落值極高和極低的小麥品種共20份進(jìn)行引物篩選,從360對(duì)引物中篩選出20對(duì)特征引物,擴(kuò)增效率高、重復(fù)性好、條帶清晰且易于區(qū)分。20對(duì)引物共擴(kuò)增出187個(gè)位點(diǎn),68個(gè)多態(tài)性位點(diǎn),173... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

6份小麥品種兩年降落值的分布直方圖

圖 4-2 2016 年 320 份小麥降落值分布直方圖Fig 4-2 Number of 320 Wheat falling number distribution histograms in 2016從圖 4-2 可以看出，320 份自然群體材料的小麥降落值有 294 個(gè)小麥品種的降落值達(dá)到 220S 以上，占所有品種的 91.82%，說明 320 份材料的小麥籽粒發(fā)芽的程度低小麥的質(zhì)量較好。有 4 個(gè)品種的降落值小于 150S,這些品種在同等環(huán)境下生長(zhǎng)說明這 4 個(gè)品種的籽粒發(fā)芽嚴(yán)重，屬于易發(fā)芽的品種。4.2小麥基因組DNA質(zhì)量檢測(cè)406 份小麥自然群體材料的 DNA 質(zhì)量是本試驗(yàn)的研究基礎(chǔ)，開發(fā)分子標(biāo)記要求有較好質(zhì)量的 DNA。本試驗(yàn)用于提取基因組 DNA 的是小麥的籽粒，因此采取的是 SDS-飽和酚法。小麥籽粒提取的 DNA 后，加入 1μL 的 RNA 酶，減少 RNA對(duì)基因組 DNA 影響。小麥基因組 DNA 母液溶解至少一天以后，取 2μLDNA 母液，利用 1.5%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，406 份中的部分 DNA 檢測(cè)電泳結(jié)果如圖 4-3。在使用之前，取 10μL 的 DNA 母液，加入 90μL 的滅菌水稀釋到 1ml。

圖 4-3 部分材料基因組 DNA 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)圖Fig4-3 Genomic DNA agarose gel electrophoresis in partial material detection map測(cè)結(jié)果表明，406 份小麥基因組 DNA 電泳的條帶較為整齊，無明顯基本上也無 RNA 的污染，提取的 DNA 的質(zhì)量較好，滿足分子生物NA 質(zhì)量的要求，可以直接用于分子標(biāo)記的 PCR 實(shí)驗(yàn)。在使用之前， 母液，加入 90μL 的滅菌水稀釋到 1ml，使 DNA 的濃度約為 50nAP-PCR擴(kuò)增引物的篩選與分析用小麥α-淀粉酶的同工酶基因序列及EST序列設(shè)計(jì)TRAP標(biāo)記的固用 α-AMY1 基因、α-AMY2 基因及 α-AMY3 基因分別設(shè)計(jì) 7 條固定引粉酶基因的 EST 序列設(shè)計(jì) 3 條固定引物，共設(shè)計(jì) 24 條固定引物。到 15 條隨機(jī)引物，共 360 對(duì) TRAP 引物。為了選出擴(kuò)增條帶較為清用 TRAP-PCR 程序特定的退火溫度進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增。瓊脂糖凝膠電泳。電泳結(jié)果表明，其中 244 對(duì)引物組合擴(kuò)增的條帶不清楚甚至沒有

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[6]利用TRAP標(biāo)記分析甘蔗遺傳多樣性[D]. 陳天生.福建農(nóng)林大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3623283