水稻是世界三大糧食作物之一,全球超過半數(shù)的人以稻米為主糧。通過提高水稻單產(chǎn)、改善稻米品質(zhì),滿足人類在生產(chǎn)生活等方面的多樣化需求具有極大的應(yīng)用價值,水稻種子內(nèi)淀粉的貯存含量對于水稻的產(chǎn)量有重要作用。淀粉的合成通常是由多種酶參與反應(yīng)完成,本研究通過應(yīng)用miRNA誘導(dǎo)的基因沉默技術(shù)（miRNA-induced gene silencing, MIGS）和基因疊加技術(shù)（gene stacking, GS）兩種不同的基因功能研究方法調(diào)控淀粉合成途徑中關(guān)鍵基因表達(dá),以期從淀粉組成、淀粉產(chǎn)量兩方面來實現(xiàn)水稻產(chǎn)量和品質(zhì)改良,主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1、基于前期建立的適用于單子葉植物的高效MIGS基因沉默體系,我們構(gòu)建了定向沉默水稻顆粒結(jié)合淀粉合成酶基因（GBSSI）的MIGS-CsGBSSI單基因載體。通過半定量RT-PCR實驗檢測到OsGBSS1基因在轉(zhuǎn)錄水平被抑制表達(dá);對胚乳進(jìn)行碘染色實驗觀察發(fā)現(xiàn),野生型呈藍(lán)黑色,轉(zhuǎn)基因胚乳呈紅棕色,顏色與糯米染色結(jié)果較為接近;此外,在掃描電鏡的觀察下,轉(zhuǎn)基因胚乳淀粉顆粒為圓形且排列致密,與野生型在形貌上存在一定的區(qū)別;利用雙波長法測定直鏈淀粉含量得知,T代胚乳中... 

【文章來源】：電子科技大學(xué)四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ｐＺＨＹ９３２骨架載體示意圖??

第二章材料與方法單基因載體構(gòu)建方法??ＯｓＧｌｕＡ２擴(kuò)增產(chǎn)物、０以（＾１２擴(kuò)增產(chǎn)物回收，％量混合，并以此ｓＧｌｕＡ２的上游５’端引物ＺＹ２８卜Ａ和ＣＭＧＰＺＪ的下游３’端引物ＺＹ２合ＰＣＲ，獲得片段大小為３９７４ｂｐ的ｐＧｌｕＡ２ｍＧＴＡ２融合產(chǎn)物；對ｐＺ休和融合產(chǎn)物分別用．＾ｒ／、５〃／？／／／雙酶切，Ｍ收人片段，浞合Ｍ收，構(gòu)建單基因載體ＰＺＨＹ９７３。??處‘?／ｉ續(xù)／／／分別酶切載體ｐＺＨＹ９７３和擴(kuò)增產(chǎn)物，回合回收產(chǎn)物進(jìn)行迚接，構(gòu)述單坫Ｗ跋體ｐＺＨＹ９７５。??連接產(chǎn)物均轉(zhuǎn)化大腸桿菌，經(jīng)Ｗ落ＰＣ’Ｒ驗證，挑選陽性單克隆，取，測序驗證。??ＡｓｃＩ?Ｘｂａｌ?ＢａｍＨＩ??

體和ａｙＧｆｉ＆Ｓ７片段，回收大片段產(chǎn)物后使川Ｇｉｂｓｏｉｉ連接方法，在ＭＣＳ位點處連??入該基因片段，構(gòu)建了?ＭＩＧＳＯＧ５Ｗ／載體，并命名為ｐＺＬＬ０２５。??載體示意圖如圖３－２：??ｍｉＲ１７３?ｍｉＲ１７３ｔｓ??ＬＢ?｜￣?－Ｔ－Ｊ３３?＂?Ｊ?７?－?｛川??ＡｓｃＩ?Ｓｐｅｌ?Ｓｂｆｌ??圖３－２ｐＺＬＬ０２５載體示意圖??構(gòu)建的載體用熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌ＤＨ５ａ，以引物ＺＬＬ００９－Ｆ、ＺＹＯＩＯ－Ｒａ進(jìn)行??菌落ＰＣＲ驗證；吸取鑒定為卩Ｈ性克隆的菌液，接種于ＬＢ液體培養(yǎng)基（５０ｍｇ／Ｌ?Ｋａｎ）??中擴(kuò)大培養(yǎng)？，提取質(zhì)粒ＤＮＡ，送至成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司測序；測序結(jié)??２８??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]水稻產(chǎn)量相關(guān)數(shù)量性狀基因研究進(jìn)展[J]. 陳明亮,熊煥金,胡蘭香,羅世友,劉志輝,肖葉青.  江西農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2014(12)
[2]基于2A肽策略構(gòu)建多基因表達(dá)載體的研究進(jìn)展[J]. 張歡,黃思超,蔡紹暉.  中國生物工程雜志. 2013(01)
[3]植物基因疊加技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 譚茂玲,李晨,閆曉紅,梁國魯,魏文輝.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(04)

碩士論文
[1]基于MIGS的水稻高效基因沉默體系建立及應(yīng)用[D]. 臧黎黎.電子科技大學(xué) 2015
[2]多基因聚合的高賴氨酸轉(zhuǎn)基因水稻的選育及評價[D]. 陳錦珠.揚(yáng)州大學(xué) 2014
[3]水稻胚乳特異性表達(dá)基因的鑒別及應(yīng)用性探索[D]. 張海燕.浙江大學(xué) 2004



本文編號：3587507