我國非主要農(nóng)作物品種由審定改為登記制度后,國內(nèi)對甜菜品種認(rèn)定和保護(hù)的需求變得迫切,如何對這些甜菜品種進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定對育種者權(quán)益保護(hù)和新品種推廣等具有重要意義。DNA條形碼技術(shù)所用DNA片段易擴(kuò)增并具有足夠的種內(nèi)、種間差異,可以對物種進(jìn)行準(zhǔn)確、快速自動(dòng)的鑒定。目前,對于甜菜的DNA條形碼技術(shù)還沒有報(bào)道,因此本試驗(yàn)選取核基因組片段和單親遺傳的葉綠體基因組作為核心DNA條形碼篩選庫,以單片段和多片段序列組合分析不同甜菜品種間遺傳差異和親緣關(guān)系并以此來構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,判斷DNA條形碼技術(shù)在甜菜品種分類鑒別上的可行性,初步建立甜菜品種鑒定體系。本試驗(yàn)選取7個(gè)片段,包括2個(gè)核基因片段（ITS,ITS2）及5個(gè)葉綠體基因片段（兩個(gè)編碼區(qū)片段rbcL和matK,三個(gè)非編碼區(qū)片段trnL-F,psbA-trnH,tr nT-trnL）擴(kuò)增84個(gè)甜菜品種的相應(yīng)片段,各片段擴(kuò)增與測序成功率均為100%,擴(kuò)增產(chǎn)物測序后片段長度比較結(jié)果為:trnL-F>matK>trnT-trnL>rbcL>ITS>ITS2>p sbA-trnH,其中trnL-F序列最長約為896bp,psb... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２各片段擴(kuò)增產(chǎn)物測序結(jié)果峰圖??Ｆｉｇ．２?Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｐｅａｋ?ｏｆ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏ?

ＪａｐｌＯ?）??＾?＆??／??Ｃ?Ｈａｐｌ３?）??圖４甜菜ｔｒｎＴ－ｔｒｎＨ序列單倍型網(wǎng)狀圖??Ｆｉｇ．４?Ｈａｐｌｏｔｙｐｅ?ｎｅｔｗｏｒｋ?ｏｆ?ｔｍｔ－ｔｒａＨ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｉｎ?ｓｕｇａｒ?ｂｅｅｔ??３．３．２?ｔｍＬ－Ｆ序列單倍型分析??將甜菜葉綠體ＤＮＡ片段ｔｍＬ－Ｆ擴(kuò)增測序所得到的序列利用ＭＥＧＡ７．０軟件??進(jìn)行比對后，通過軟件Ｄｎａｓｐ５．０分析，結(jié)果檢測到８４個(gè)甜菜品種個(gè)體共有６??種單倍型，編號為Ｈａｐｌ？Ｈａｐ６?（表８），各個(gè)單倍型特征如圖５所示，利用軟件??ＴＣＳ１．２．１對８４個(gè)甜菜品種的６種單倍型進(jìn)行分析，構(gòu)建葉綠體單倍型網(wǎng)絡(luò)圖，??得到的單倍型網(wǎng)狀圖如圖５所示，圖中，方框里的單倍型為最古老的單倍型，圓??圈內(nèi)的單倍型是其演化單倍型。圖中ＨａＰ２是祖先單倍型，也是最大共享單倍型，??Ｈａｐ３，?Ｈａｐ４，?Ｈａｐ５為演化單倍型。結(jié)合單倍型網(wǎng)狀圖，Ｈａｐ３，?Ｈａｐ４由Ｈａｐ２??直接進(jìn)化發(fā)育而來，Ｈａｐ５由Ｈａｐ３進(jìn)化發(fā)育而來。ＫＷＳ３９３５，ＳＸ１５１１，Ｈ００３??親緣關(guān)系較近。??（Ｈ？ｐ４?）??、—Ｈａｐｌ?單倍型?１?１?２?３?４?５????Ｈａｐ?１?Ｃ?Ｃ?Ｔ?Ｇ?Ｃ??Ｈａｐ２????Ｈａｐ?２?Ｃ?Ｃ?Ａ?Ａ?Ｃ??＾?Ｈａｐ?３?Ｇ?Ｃ?Ａ?Ａ?Ｃ??（ＨａｐＳ?ｊ??Ｈａｐ?４?Ｃ?Ｃ?Ａ?Ａ?Ｇ??（＾Ｔ）?ＨａｐＳ?Ｇ?Ｇ?Ａ?Ａ?Ｃ??圖５甜菜ｔｒｎＬ－Ｆ序列單倍型網(wǎng)狀圖??Ｆｉｇ．?５?Ｈａｐｌｏｔｙｐｅ?ｎｅｔｗｏｒｋ?ｏｆ?ｔｍＬ－Ｆ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｉｎ?ｓｕｇａｒ?ｂｅｅｔ??

２４?甜菜ＤＮＡ條形碼技術(shù)的研發(fā)及其應(yīng)用???（Ｈａｐｌ７?）??廣一＇－Ｎ?廣一＇■＇Ｎ?廣、｜—１—ｒ?－－Ｈａｐ１２??Ｈ叩３Ｈａｐ１?ＶｔＪａｐｌＯ?）??＾?＆??／??Ｃ?Ｈａｐｌ３?）??圖４甜菜ｔｒｎＴ－ｔｒｎＨ序列單倍型網(wǎng)狀圖??Ｆｉｇ．４?Ｈａｐｌｏｔｙｐｅ?ｎｅｔｗｏｒｋ?ｏｆ?ｔｍｔ－ｔｒａＨ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｉｎ?ｓｕｇａｒ?ｂｅｅｔ??３．３．２?ｔｍＬ－Ｆ序列單倍型分析??將甜菜葉綠體ＤＮＡ片段ｔｍＬ－Ｆ擴(kuò)增測序所得到的序列利用ＭＥＧＡ７．０軟件??進(jìn)行比對后，通過軟件Ｄｎａｓｐ５．０分析，結(jié)果檢測到８４個(gè)甜菜品種個(gè)體共有６??種單倍型，編號為Ｈａｐｌ？Ｈａｐ６?（表８），各個(gè)單倍型特征如圖５所示，利用軟件??ＴＣＳ１．２．１對８４個(gè)甜菜品種的６種單倍型進(jìn)行分析，構(gòu)建葉綠體單倍型網(wǎng)絡(luò)圖，??得到的單倍型網(wǎng)狀圖如圖５所示，圖中，方框里的單倍型為最古老的單倍型，圓??圈內(nèi)的單倍型是其演化單倍型。圖中ＨａＰ２是祖先單倍型，也是最大共享單倍型，??Ｈａｐ３，?Ｈａｐ４，?Ｈａｐ５為演化單倍型。結(jié)合單倍型網(wǎng)狀圖，Ｈａｐ３，?Ｈａｐ４由Ｈａｐ２??直接進(jìn)化發(fā)育而來，Ｈａｐ５由Ｈａｐ３進(jìn)化發(fā)育而來。ＫＷＳ３９３５，ＳＸ１５１１，Ｈ００３??親緣關(guān)系較近。??（Ｈ？ｐ４?）??、—Ｈａｐｌ?單倍型?１?１?２?３?４?５????Ｈａｐ?１?Ｃ?Ｃ?Ｔ?Ｇ?Ｃ??Ｈａｐ２????Ｈａｐ?２?Ｃ?Ｃ?Ａ?Ａ?Ｃ??＾?Ｈａｐ?３?Ｇ?Ｃ?Ａ?Ａ?Ｃ??（ＨａｐＳ?ｊ??Ｈａｐ?４?Ｃ?Ｃ?Ａ?Ａ?Ｇ??（＾Ｔ）?ＨａｐＳ?Ｇ?Ｇ?Ａ?Ａ?Ｃ?

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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[5]假單胞菌屬植物病原菌DNA條形碼檢測技術(shù)研究[D]. 盧松玉.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[6]巴戟天及其6種近緣植物的鑒別研究[D]. 衛(wèi)瀅.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2017
[7]基于DNA條形碼技術(shù)的山東半島潮間帶褐藻和綠藻分類研究[D]. 薛紅凡.中國海洋大學(xué) 2014
[8]貴州苗藥艾納香DNA條形碼的鑒定研究[D]. 魏妮娜.遵義醫(yī)學(xué)院 2014
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[10]基于DNA條形碼技術(shù)的降香黃檀與多裂黃檀木材識(shí)別研究[D]. 張浩.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號：3584579