在自然界中,光合作用是萬物生長的能量來源,它能利用太陽能將無機(jī)物轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)物,為生物體代謝所使用。各種糧食作物的生產(chǎn)也離不開光合作用,只有充分提高光合能力,提升光合效率才能有效地增加糧食的產(chǎn)量,滿足人類日益增長的需求。然而植物的光合作用受葉綠體發(fā)育和葉綠素合成等相關(guān)因素的影響,探索這些過程中相關(guān)基因的功能,有助于我們更好地利用光合作用,提高糧食產(chǎn)量。本實(shí)驗(yàn)室前期獲得了一個(gè)水稻深綠穗dgp1（dark green panicle1）的突變體,該突變體的葉、穗都呈現(xiàn)出深綠表型,同時(shí)葉綠素含量增加,光合效率增強(qiáng),并且已經(jīng)通過圖位克隆方法克隆到該基因。由于DGP1基因編碼一個(gè)未知功能的蛋白,所以首先需要在水稻中篩選出與它互作的蛋白,并通過其互作蛋白的特性來深入研究該基因調(diào)控光合效率的機(jī)制。以水稻日本晴各個(gè)組織混合提取的RNA為材料,構(gòu)建酵母雙雜AD（PGADT7）載體上的cDNA文庫。將DGP1基因構(gòu)建到BD（PGBKT7）載體上,作為誘餌蛋白,它沒有自激活現(xiàn)象。通過酵母雙雜交的方法篩選DGP1的互作蛋白,發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)葉綠體發(fā)育相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子GOLDEN2-LIKE1（GLK1）和GOLDEN2... 

【文章來源】：浙江師范大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

RNA質(zhì)量的檢列

ｐ，的要求。??３．１．３ｃＤＮＡ文庫的檢測??由于合成的ｃＤＮＡ條帶富集的區(qū)域以及條帶的亮度較為理想，所以經(jīng)過純??化、Ｓｆｉｌ酶切、ＣＨＲＯＭＡ?ＳＰ１Ｎ－Ｉ０００－ＴＥ過柱處理后，能與用Ｓｆｉｌ酶線性化處理??后的ｐＧＡＤＴ７載體進(jìn)行連接并純化精制為初級(jí)ｃＤＮＡ。??初級(jí)ｃＤＮＡ文庫連接液轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞后，統(tǒng)計(jì)在氨芐抗性的培??養(yǎng)板上生長出的菌落個(gè)數(shù)并計(jì)算，得到初級(jí)文庫庫容量為＞２．〇ｘｌ〇（’ｃｆｕ，滿足庫??容的要求。??使用ＫｉＡＤＴ７－Ｆ和ＰＧＡＤＴ７－Ｒ的引物序列ＰＣＲ檢測文庫插入片段，由圖??２．３的電泳圖顯示，插入片段集中在５００？２２５０ｂｐ之間，片段的大小分布也說明??ｃＤＮＡ文庫的質(zhì)量符合實(shí)驗(yàn)要求。??

圖３．２原核表達(dá)蛋白親和純化后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電泳圖??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3552318