大麥?zhǔn)鞘澜缟现匾暮坦阮愖魑?因其用途廣泛而被稱為“三元作物”或“多元作物”。大麥為二倍體自花授粉作物,其染色體數(shù)少（2n=14）,基因組較小,在麥類作物中相對較易開展基因克隆和功能解析等分子生物學(xué)研究,目前已完成了全基因組測序和部分基因功能注釋。成熟的遺傳轉(zhuǎn)化體系是基因克隆和功能解析的主要技術(shù)支撐之一。大麥功能基因的不斷挖掘以及組培技術(shù)的持續(xù)完善,使大麥轉(zhuǎn)基因技術(shù)有了較大進展,在基因功能研究方面取得了許多具有積極意義的成果,對MicroRNAs的功能解析就是其成果之一。諸多研究顯示,在許多作物中,MicroRNAs參與其生長發(fā)育、抗病、抗逆等過程。miR528是近年發(fā)現(xiàn)的一種MicroRNA,在調(diào)控植物的生長發(fā)育和對鹽漬和低氮的耐受性方面有重要作用。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)對miR528進行有效利用及功能解析將為作物遺傳改良提供重要信息,本研究以十個大麥品種的幼胚與成熟胚愈傷組織為材料,以潮霉素hptⅡ基因為篩選標(biāo)記,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù),將雙35S啟動子過表達osa-miR528基因載體導(dǎo)入大麥中,獲得了含有目的基因osa-miR528的不同大麥品種的轉(zhuǎn)基因陽性植株。主要結(jié)果如下:（... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

GV3101單菌落osa-miR528部分序列PCR檢測結(jié)果

30圖 3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的幼胚愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化流程Fig.3 Agrobacterium-mediated genetic transformation process of immature embryos callus注：A：幼胚 B：愈傷組織 C：共培養(yǎng) D：恢復(fù)培養(yǎng) E：分化篩選 F：生根培養(yǎng) G：春化后煉苗 H-I：再生植株及移栽入土 J-K：T0 代轉(zhuǎn)基因植株 L：種子的收獲Note: A: Immature embryos B: Callus C: co-culture D: Recovery culture E: Differentiation screening F: Rooting cultureG: Training seedlings after vernalization H-I: Regenerated plants and transplanted into soil J-K: Transgenic plants of T0generation L: Harvested seeds

待再生苗在營養(yǎng)土中長勢健壯時（見圖3J），取其幼嫩葉片，提取DNA。然后用抗性篩選潮霉素基因hptⅡ引物對再生苗DNA進行PCR擴增檢測，可以初步確定其中的轉(zhuǎn)基因陽性植株。圖4左圖是再生苗中抗性篩選基因hptⅡ基因的PCR檢測結(jié)果，目標(biāo)條帶大小為214 bp。由圖4左圖可以看出，再生植株中，有三株擴增出目標(biāo)條帶，且條帶的大小與質(zhì)粒相同。陰性對照沒擴增出目標(biāo)條帶，因此，可以初步確定，獲得了三株帶有目標(biāo)片段的轉(zhuǎn)基因陽性植株，分別為華大麥5號兩株，美里黃金一株。圖4右圖為遺傳轉(zhuǎn)化過程中，經(jīng)PCR檢測，初步鑒定得到的轉(zhuǎn)基因植株，待其成熟后

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3470025