【目的】建立水稻葉片蛋白的多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）質(zhì)譜絕對定量方法�！痉椒ā克救~片蛋白經(jīng)含1.0%十二烷基硫酸鈉（SDS）的磷酸鹽（PBS）緩沖液提取,丙酮沉淀除雜純化、胰蛋白酶消化,酶解液經(jīng)液相色譜分離,MRM質(zhì)譜監(jiān)測,外標(biāo)法定量�！窘Y(jié)果】向提取緩沖液中加入1.0%SDS可增強水稻葉片中16種靶蛋白和總蛋白質(zhì)的提取效果;不同有機試劑處理,總蛋白質(zhì)沉淀量存在顯著差異（P<0.05）,沉淀能力從強到弱依次為乙腈>丙酮>異丙醇>甲醇>乙醇;對于16種目標(biāo)蛋白,總體以丙酮沉淀效果最好,其次是異丙醇和乙腈,甲醇和乙醇效果較差。該方法線性范圍均達到3個數(shù)量級,定量限為0.1～2.5 nmol/L,灌漿期16種水稻葉片蛋白質(zhì)含量為6.0～2818.1μg/g,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于14%�！窘Y(jié)論】SDS可顯著提高水稻葉片蛋白提取效果,采用丙酮或乙腈可獲得較好的蛋白沉淀效果,但不同蛋白質(zhì)略有差異。結(jié)合MRM質(zhì)譜監(jiān)測技術(shù)可實現(xiàn)水稻葉片蛋白的絕對定量,方法線性范圍寬、敏度高、重復(fù)性好。 

【文章來源】：中國水稻科學(xué). 2020,34(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

16種特征肽段的總離子流

Bereman等[13]研究表明，過高濃度的SDS會抑制胰蛋白酶活性，干擾RPLC的分離和MS分析。因此，SDS殘留量可作為粗蛋白沉淀除雜的一項重要指標(biāo)。實驗結(jié)果顯示，采用上述5種有機試劑對SDS的去除率均可達94.2%以上，均能保證樣品中SDS濃度低于0.01%，符合HPLC和LC/MS分析條件[21]。綜上，實驗選擇丙酮作為16種目標(biāo)蛋白的沉淀劑。圖3 五種有機試劑對16種水稻葉片蛋白沉淀效果比較

五種有機試劑對16種水稻葉片蛋白沉淀效果比較


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