鐵皮石斛（Dendrobium catenatum）是蘭科石斛屬植物,九大仙草之首,富含多糖、黃酮、生物堿、松柏苷、紫丁香苷、丁香醛等次生代謝產(chǎn)物。使用原球莖代替成苗進(jìn)行次生代謝產(chǎn)物生產(chǎn),是實(shí)現(xiàn)野生石斛資源可持續(xù)利用的有效方式之一。溫度是植物體內(nèi)物質(zhì)積累的重要影響因子,晝夜溫差對(duì)作物光合、生理特性、花芽分化、物質(zhì)積累及產(chǎn)量品質(zhì)等方面均有顯著影響。本文以鐵皮石斛原球莖為材料,優(yōu)化了鐵皮石斛原球莖增殖體系;建立了同時(shí)測(cè)定鐵皮石斛中松柏苷、紫丁香苷的方法;分離了DcF5H、DcCOMT、DcCAD基因cDNA序列及DcCAD基因啟動(dòng)子序列;通過定量PCR分析了DcF5H、DcCOMT、DcCAD表達(dá)量的變化與松柏苷、紫丁香苷含量在不同溫差處理下的相互關(guān)系。主要研究結(jié)果如下:1鐵皮石斛原球莖增殖條件優(yōu)化以鐵皮石斛原球莖為材料,1/2 MS+50 g/L土豆泥為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,研究碳源、氨基酸以及不同培養(yǎng)方式對(duì)其增殖的影響。結(jié)果表明:添加葡萄糖為碳源,原球莖團(tuán)塊細(xì)小,顏色呈綠色,無分化,30 d時(shí)增殖系數(shù)為3.75,利于原球莖增殖;基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加氨基酸不利于原球莖增殖;懸浮培養(yǎng)鐵皮石斛原球莖30 d... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮寫詞
摘要
Abstract
第一章 引言
    1 鐵皮石斛離體培養(yǎng)研究進(jìn)展
        1.1 鐵皮石斛離體培養(yǎng)材料選擇研究進(jìn)展
        1.2 碳源、氨基酸對(duì)鐵皮石斛離體培養(yǎng)的影響
    2 溫度因子對(duì)植物代謝產(chǎn)物積累影響的研究進(jìn)展
        2.1 低溫對(duì)植物代謝產(chǎn)物積累的影響
        2.2 高溫對(duì)植物代謝產(chǎn)物積累的影響
        2.3 晝夜溫差對(duì)植物代謝產(chǎn)物積累的影響
    3 松柏苷、紫丁香苷研究進(jìn)展
        3.1 松柏苷、紫丁香苷的分布及功能
        3.2 植物中松柏苷、紫丁香苷測(cè)定方法研究進(jìn)展
    4 松柏苷、紫丁香苷合成途徑相關(guān)基因研究進(jìn)展
        4.1 F5H基因研究進(jìn)展
        4.2 COMT基因研究進(jìn)展
        4.3 CAD基因研究進(jìn)展
    5 本研究意義和主要內(nèi)容
        5.1 研究意義
        5.2 研究內(nèi)容
第二章 鐵皮石斛原球莖增殖優(yōu)化
    第一節(jié) 碳源類型對(duì)鐵皮石斛原球莖增殖的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 固態(tài)培養(yǎng)中不同碳源對(duì)鐵皮石斛原球莖增殖的影響
            2.2 液態(tài)培養(yǎng)中不同碳源對(duì)鐵皮石斛原球莖增殖的影響
        3 討論
            3.1 葡萄糖為碳源最利于鐵皮石斛原球莖增殖
            3.2 液體培養(yǎng)促進(jìn)鐵皮石斛原球莖增殖
    第二節(jié) 三種氨基酸添加對(duì)鐵皮石斛原球莖增殖的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
        3 討論
    第三節(jié) 晝夜溫差對(duì)鐵皮石斛原球莖增殖的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
        3 討論
第三章 晝夜溫差對(duì)鐵皮石斛原球莖中松柏苷、紫丁香苷含量的影響
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 UPLC分析方法的建立
        2.2 UPLC分析方法的考察
        2.3 晝夜溫差對(duì)鐵皮石斛樣品中松柏苷、紫丁香苷含量的影響
    3 討論
        3.1 建立同時(shí)測(cè)定松柏苷和紫丁香苷UPLC法
        3.2 4-8℃溫差利于鐵皮石斛松柏苷和紫丁香苷積累
第四章 鐵皮石斛DcF5H克隆及生物信息學(xué)分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 鐵皮石斛總RNA的提取與質(zhì)量檢測(cè)
        2.2 鐵皮石斛DcF5H基因ORF驗(yàn)證
        2.3 鐵皮石斛DcF5H基因結(jié)構(gòu)分析
        2.4 鐵皮石斛DcF5H理化性質(zhì)分析
        2.5 鐵皮石斛DcF5H同源性分析
        2.6 鐵皮石斛DcF5H保守結(jié)構(gòu)域分析
        2.7 鐵皮石斛DcF5H亞細(xì)胞定位與信號(hào)肽預(yù)測(cè)
        2.8 鐵皮石斛DcF5H跨膜結(jié)構(gòu)與磷酸位點(diǎn)預(yù)測(cè)
        2.9 鐵皮石斛DcF5H親疏水特性預(yù)測(cè)及分析
        2.10 鐵皮石斛DcF5H二級(jí)結(jié)構(gòu)分析與三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.11 鐵皮石斛DcF5H系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建
    3 討論
第五章 鐵皮石斛DcCOMT克隆及生物信息學(xué)分析
    第一節(jié) 鐵皮石斛DcCOMT基因克隆與生物信息學(xué)分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 鐵皮石斛總RNA的提取與質(zhì)量檢測(cè)
            2.2 鐵皮石斛DcCOMT基因ORF驗(yàn)證
            2.3 鐵皮石斛DcCOMT結(jié)構(gòu)分析
            2.4 鐵皮石斛DcCOMT蛋白理化性質(zhì)分析
            2.5 鐵皮石斛DcCOMT蛋白同源性分析
            2.6 鐵皮石斛DcCOMT蛋白保守結(jié)構(gòu)域分析
            2.7 鐵皮石斛DcCOMT亞細(xì)胞定位與信號(hào)肽預(yù)測(cè)
            2.8 鐵皮石斛DcCOMT跨膜結(jié)構(gòu)與磷酸位點(diǎn)預(yù)測(cè)
            2.9 鐵皮石斛DcCOMT親疏水特性預(yù)測(cè)及分析
            2.10 鐵皮石斛DcCOMT二級(jí)結(jié)構(gòu)分析與三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
            2.11 鐵皮石斛DcCOMT系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建
        3 討論
    第二節(jié) 鐵皮石斛DcCOMT密碼子選用偏好性分析
        1 材料與方法
            1.1 序列來源
            1.2 分析軟件
        2 結(jié)果分析
            2.1 鐵皮石斛DcCOMT密碼子使用偏好性分析
            2.2 物種間密碼子偏好模式分析
            2.3 外源表達(dá)載體的選擇
        3 討論
            3.1 鐵皮石斛DcCOMT密碼子偏好性分析
            3.2 密碼子使用偏性在系統(tǒng)聚類中的應(yīng)用
            3.3 鐵皮石斛異源表達(dá)和遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的選擇
第六章 鐵皮石斛DcCAD基因和啟動(dòng)子克隆與生物信息學(xué)分析
    第一節(jié) 鐵皮石斛DcCOMT基因克隆與生物信息學(xué)分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 鐵皮石斛總RNA的提取與質(zhì)量檢測(cè)
            2.2 鐵皮石斛DcCAD基因ORF的驗(yàn)證
            2.3 鐵皮石斛DcCAD基因結(jié)構(gòu)分析
            2.4 鐵皮石斛DcCAD理化性質(zhì)分析
            2.5 鐵皮石斛DcCAD蛋白同源性分析
            2.6 鐵皮石斛DcCAD保守結(jié)構(gòu)域分析
            2.7 鐵皮石斛DcCAD亞細(xì)胞定位與信號(hào)肽預(yù)測(cè)
            2.8 鐵皮石斛DcCAD跨膜結(jié)構(gòu)與磷酸位點(diǎn)預(yù)測(cè)
            2.9 鐵皮石斛DcCAD親疏水特性預(yù)測(cè)及分析
            2.10 鐵皮石斛DcCAD二級(jí)結(jié)構(gòu)分析與三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
            2.11 鐵皮石斛DcCAD系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建
        3 討論
    第二節(jié) 鐵皮石斛DcCAD啟動(dòng)子克隆分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 鐵皮石斛DcCAD啟動(dòng)子序列的驗(yàn)證
            2.2 鐵皮石斛DcCAD基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)預(yù)測(cè)
            2.3 鐵皮石斛DcCAD基因啟動(dòng)子順式作用元件分析
            2.4 鐵皮石斛DcCAD基因啟動(dòng)子CpG島預(yù)測(cè)
        3 討論
第七章 鐵皮石斛DcF5H、DcCOMT與 DcCAD在不同溫差處理下的表達(dá)分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 DcF5H在不同溫差處理的表達(dá)分析
        2.2 DcCOMT在不同溫差處理的表達(dá)分析
        2.3 DcCAD在不同溫差處理的表達(dá)分析
        2.4 DcF5H、DcCOMT、DcCAD表達(dá)量與松柏苷、紫丁香苷含量的相關(guān)性
    3 討論
第八章 小結(jié)與展望
    1 鐵皮石斛原球莖增殖優(yōu)化
    2 UPLC法同時(shí)測(cè)定鐵皮石斛原球莖中松柏苷、紫丁香苷
    3 鐵皮石斛DcF5H克隆及生物信息學(xué)分析
    4 鐵皮石斛DcCOMT克隆及生物信息學(xué)分析
    5 鐵皮石斛DcCAD基因及其啟動(dòng)子克隆及生物信息學(xué)分析
    6 鐵皮石斛DcF5H、DcCOMT、DcCAD基因的定量表達(dá)
    7 展望
參考文獻(xiàn)
附錄 A 圖例及圖版說明
附錄 B 本研究使用的基因序列
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]茶樹細(xì)胞色素P450基因CYP710A1的克隆及差異表達(dá)特征分析[J]. 單睿陽,陳常頌,鐘秋生,林鄭和,陳志輝,游小妹.  茶葉學(xué)報(bào). 2018(04)
[2]潑墨石斛高位芽組培快繁體系的建立[J]. 龔建英,王華新,陳寶玲,唐遒冥,蒙芳,蘇莉花.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2019(01)
[3]報(bào)春石斛組培快繁技術(shù)體系的建立[J]. 仇碩,趙健,趙志國,夏科,李菲,唐鳳鸞.  北方園藝. 2019(03)
[4]超高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定三七的葉和花中3個(gè)皂苷類成分含量[J]. 雷蓉,趙振霞,劉永利,馮麗,魏鋒.  藥物分析雜志. 2018(07)
[5]黃花苜�；ㄋ幣囵B(yǎng)再生體系的建立與單倍體鑒定[J]. 徐舶,高霞,石鳳翎,崔楠,烏日娜.  草業(yè)科學(xué). 2018(05)
[6]蘭科植物FNR基因的密碼子偏好性分析[J]. 李蓉,謝析穎,王雪晶,蘇立遙,林玉玲,郭容芳,陳裕坤,賴鐘雄,徐涵.  熱帶作物學(xué)報(bào). 2018(06)
[7]HPLC法測(cè)定鐵皮石斛中酚酸類物質(zhì)組成及含量[J]. 李巖,陳德泉,葉澤波.  食品研究與開發(fā). 2018(07)
[8]超高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定金花葵花中5個(gè)黃酮類成分含量[J]. 白云,朱瑞超,李晉,馬琳,何俊,常艷旭.  天津中醫(yī)藥. 2018(02)
[9]云南含笑果實(shí)中的酚類成分研究[J]. 丁林芬,謝章巧,石興義,張勇,王海垠,吳興德.  亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥. 2018(02)
[10]尾葉桉COMT和CCoAOMT基因定向調(diào)控木質(zhì)素單體合成的煙草轉(zhuǎn)化研究[J]. 陳博雯,劉海龍,肖玉菲,覃子海,張燁,張曉寧.  中國生物工程雜志. 2018(03)

碩士論文
[1]霍山石斛生物鐘相關(guān)基因克隆及其與培養(yǎng)物糖含量分析[D]. 謝析穎.福建農(nóng)林大學(xué) 2017
[2]真菌誘導(dǎo)子對(duì)鐵皮石斛原球莖生物堿含量影響及其機(jī)理[D]. 林艷君.福建農(nóng)林大學(xué) 2015
[3]晝夜溫差對(duì)鐵皮石斛原球莖多糖含量的影響及機(jī)理研究[D]. 張春柳.福建農(nóng)林大學(xué) 2015
[4]不同葉面肥對(duì)鐵皮石斛藥效成分含量的影響[D]. 董思艷.云南中醫(yī)學(xué)院 2014
[5]天山雪蓮培養(yǎng)物的化學(xué)成分及紫丁香苷含量研究[D]. 陳日道.沈陽藥科大學(xué) 2009
[6]蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位的識(shí)別[D]. 賈蕓.內(nèi)蒙古工業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3460018