發(fā)布時(shí)間：2021-10-26 09:32

　　為研究ZmMYB59基因啟動(dòng)子的表達(dá)模式,以玉米自交系‘B73’幼苗基因組DNA為模板,克隆ZmMYB59基因2個(gè)啟動(dòng)子片段分別命名為MYB59-P-1、MYB59-P-2,構(gòu)建GUS植物表達(dá)載體pCXGUS-MYB-1K,pCXGUS-MYB-2K,并通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化水稻‘日本晴’獲得GUS植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)基因植株。通過(guò)PlantCARE軟件進(jìn)行生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)ZmMYB59基因啟動(dòng)子中具有ABRE和CCGTCC-box等重要的順式作用元件。GUS染色結(jié)果顯示:1)pCXGUS-MYB-1K的種子沒(méi)有著色,表明其未驅(qū)動(dòng)GUS在種子中表達(dá),pCXGUS-MYB-2K的種子胚乳邊緣著色,表明其驅(qū)動(dòng)的GUS在種子胚乳邊緣表達(dá);2)種子萌發(fā)期pCXGUSMYB-1K只有芽尖著色,表明其僅驅(qū)動(dòng)GUS在芽尖表達(dá),pCXGUS-MYB-2K芽尖和根均著色,芽尖著色較深,根維管束細(xì)胞少量著色,表明其驅(qū)動(dòng)的GUS主要在芽尖表達(dá),而在根部維管束組織中表達(dá)較弱;3)苗期pCXGUSMYB-1K,pCXGUS-MYB-2K植株的根、莖、葉均能著色,但后者著色較深,表明ZmMYB59基因的啟動(dòng)子可能是組... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,25(04)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

pCXGUS-MYB-1K和pCXGUS-MYB-2K水稻的轉(zhuǎn)化

啟動(dòng)子作為轉(zhuǎn)錄水平重要的調(diào)節(jié)方式備受關(guān)注，通過(guò)對(duì)啟動(dòng)子的研究可以預(yù)測(cè)基因啟動(dòng)子中重要的元件，還能由此對(duì)基因的表達(dá)模式進(jìn)行研究。根據(jù)啟動(dòng)子中相關(guān)順式作用元件的分布，將啟動(dòng)子劃分為包含不同長(zhǎng)度的缺失片段，并將缺失片段與帶有GUS報(bào)告基因的植物表達(dá)載體融合，通過(guò)比較不同缺失片段啟動(dòng)報(bào)告基因表達(dá)的強(qiáng)弱及其在組織中的定位來(lái)鑒定啟動(dòng)子缺失片段的時(shí)空表達(dá)特性與啟動(dòng)子中相關(guān)順式作用元件的作用[16]。圖6 T1代轉(zhuǎn)基因水稻苗期各組織的GUS組織化學(xué)染色

圖5 T1代轉(zhuǎn)基因水稻的種子和萌發(fā)期各組織的GUS組織化學(xué)染色[孫永偉等17]利用啟動(dòng)子缺失的方法發(fā)現(xiàn)響應(yīng)外源激素ABA的應(yīng)答元件在啟動(dòng)子序列660～2 000bp。大豆rbcS[18]基因啟動(dòng)活性最高的是長(zhǎng)度為712bp的啟動(dòng)子，長(zhǎng)度為1 089bp的rbcS基因啟動(dòng)子含有光誘導(dǎo)元件并且還有組織特異表達(dá)特性。PGHNBS[19]啟動(dòng)子的調(diào)控元件中，-1 071～-959bp區(qū)域存在韌皮部特異表達(dá)元件，增強(qiáng)子元件位于-1 559～-1 420bp。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]水稻組織特異表達(dá)啟動(dòng)子的分離克隆、功能分析及應(yīng)用[D]. 葉榮建.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012

碩士論文
[1]水稻開(kāi)花基因OsMADS-BOX59與OsTFL2初步研究[D]. 韓法營(yíng).廣西大學(xué) 2015
[2]水稻種胚特異基因OsESG1及其啟動(dòng)子的研究[D]. 房孝良.山東師范大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3459268