玉米ZmMYB59基因啟動子的克隆及功能分析
發(fā)布時間：2021-10-26 09:32
為研究ZmMYB59基因啟動子的表達模式,以玉米自交系‘B73’幼苗基因組DNA為模板,克隆ZmMYB59基因2個啟動子片段分別命名為MYB59-P-1、MYB59-P-2,構(gòu)建GUS植物表達載體pCXGUS-MYB-1K,pCXGUS-MYB-2K,并通過農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化水稻‘日本晴’獲得GUS植物表達載體轉(zhuǎn)基因植株。通過PlantCARE軟件進行生物信息學分析,發(fā)現(xiàn)ZmMYB59基因啟動子中具有ABRE和CCGTCC-box等重要的順式作用元件。GUS染色結(jié)果顯示:1)pCXGUS-MYB-1K的種子沒有著色,表明其未驅(qū)動GUS在種子中表達,pCXGUS-MYB-2K的種子胚乳邊緣著色,表明其驅(qū)動的GUS在種子胚乳邊緣表達;2)種子萌發(fā)期pCXGUSMYB-1K只有芽尖著色,表明其僅驅(qū)動GUS在芽尖表達,pCXGUS-MYB-2K芽尖和根均著色,芽尖著色較深,根維管束細胞少量著色,表明其驅(qū)動的GUS主要在芽尖表達,而在根部維管束組織中表達較弱;3)苗期pCXGUSMYB-1K,pCXGUS-MYB-2K植株的根、莖、葉均能著色,但后者著色較深,表明ZmMYB59基因的啟動子可能是組...
【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學學報. 2020,25(04)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：8 頁
【部分圖文】：
pCXGUS-MYB-1K和pCXGUS-MYB-2K水稻的轉(zhuǎn)化
啟動子作為轉(zhuǎn)錄水平重要的調(diào)節(jié)方式備受關注，通過對啟動子的研究可以預測基因啟動子中重要的元件，還能由此對基因的表達模式進行研究。根據(jù)啟動子中相關順式作用元件的分布，將啟動子劃分為包含不同長度的缺失片段，并將缺失片段與帶有GUS報告基因的植物表達載體融合，通過比較不同缺失片段啟動報告基因表達的強弱及其在組織中的定位來鑒定啟動子缺失片段的時空表達特性與啟動子中相關順式作用元件的作用[16]。圖6 T1代轉(zhuǎn)基因水稻苗期各組織的GUS組織化學染色
圖5 T1代轉(zhuǎn)基因水稻的種子和萌發(fā)期各組織的GUS組織化學染色[孫永偉等17]利用啟動子缺失的方法發(fā)現(xiàn)響應外源激素ABA的應答元件在啟動子序列660～2 000bp。大豆rbcS[18]基因啟動活性最高的是長度為712bp的啟動子，長度為1 089bp的rbcS基因啟動子含有光誘導元件并且還有組織特異表達特性。PGHNBS[19]啟動子的調(diào)控元件中，-1 071～-959bp區(qū)域存在韌皮部特異表達元件，增強子元件位于-1 559～-1 420bp。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]水稻種子蠟質(zhì)基因表達分析[J]. 孫雙燕,徐小龍,李建粵. 種子. 2018(11)
[2]植物啟動子研究進展[J]. 雒雅婧,李杰,張爽,杜克久. 北方園藝. 2015(22)
[3]大豆rbcS基因啟動子的克隆及在轉(zhuǎn)基因煙草中的功能缺失分析[J]. 崔喜艷,陳眾峰,范貝,韓琳,劉曉慶,董雅致,張治安. 西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版). 2015(05)
[4]植物啟動子研究進展[J]. 李田,孫景寬,劉京濤. 生物技術通報. 2015(02)
[5]剛毛檉柳水通道蛋白ThPIP基因啟動子的克隆及其活性分析[J]. 王超,李昕荷,張瑞芝,韓悅,齊波,王玉成. 安徽農(nóng)業(yè)科學. 2014(24)
[6]玉米秸稈低溫降解復合菌系的篩選[J]. 薩如拉,高聚林,于曉芳,胡樹平. 中國農(nóng)業(yè)科學. 2013(19)
[7]集胞藻sbtA基因具有提高水稻旗葉葉綠素含量及株高的功能[J]. 楊浩萌,薛哲勇,趙樂,漆小泉,黃芳. 植物生理學報. 2013(04)
[8]棉花PGHNBS啟動子維管束特異表達元件的分離及功能研究[J]. 楊郁文,張保龍,陳天子,高媛媛. 江蘇農(nóng)業(yè)學報. 2012(06)
[9]雷公藤hmgr基因克隆、序列分析及誘導表達[J]. 武瑩,李威,祝傳書,王永宏,張興. 西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版). 2012(11)
[10]小麥穗發(fā)芽抗性相關Vp1基因啟動子的分離及功能驗證[J]. 孫永偉,聶麗娜,馬有志,徐兆師,夏蘭琴. 作物學報. 2011(10)
博士論文
[1]水稻組織特異表達啟動子的分離克隆、功能分析及應用[D]. 葉榮建.華中農(nóng)業(yè)大學 2012
碩士論文
[1]水稻開花基因OsMADS-BOX59與OsTFL2初步研究[D]. 韓法營.廣西大學 2015
[2]水稻種胚特異基因OsESG1及其啟動子的研究[D]. 房孝良.山東師范大學 2012
本文編號：3459268
【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學學報. 2020,25(04)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：8 頁
【部分圖文】：
pCXGUS-MYB-1K和pCXGUS-MYB-2K水稻的轉(zhuǎn)化
啟動子作為轉(zhuǎn)錄水平重要的調(diào)節(jié)方式備受關注，通過對啟動子的研究可以預測基因啟動子中重要的元件，還能由此對基因的表達模式進行研究。根據(jù)啟動子中相關順式作用元件的分布，將啟動子劃分為包含不同長度的缺失片段，并將缺失片段與帶有GUS報告基因的植物表達載體融合，通過比較不同缺失片段啟動報告基因表達的強弱及其在組織中的定位來鑒定啟動子缺失片段的時空表達特性與啟動子中相關順式作用元件的作用[16]。圖6 T1代轉(zhuǎn)基因水稻苗期各組織的GUS組織化學染色
圖5 T1代轉(zhuǎn)基因水稻的種子和萌發(fā)期各組織的GUS組織化學染色[孫永偉等17]利用啟動子缺失的方法發(fā)現(xiàn)響應外源激素ABA的應答元件在啟動子序列660～2 000bp。大豆rbcS[18]基因啟動活性最高的是長度為712bp的啟動子，長度為1 089bp的rbcS基因啟動子含有光誘導元件并且還有組織特異表達特性。PGHNBS[19]啟動子的調(diào)控元件中，-1 071～-959bp區(qū)域存在韌皮部特異表達元件，增強子元件位于-1 559～-1 420bp。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]水稻種子蠟質(zhì)基因表達分析[J]. 孫雙燕,徐小龍,李建粵. 種子. 2018(11)
[2]植物啟動子研究進展[J]. 雒雅婧,李杰,張爽,杜克久. 北方園藝. 2015(22)
[3]大豆rbcS基因啟動子的克隆及在轉(zhuǎn)基因煙草中的功能缺失分析[J]. 崔喜艷,陳眾峰,范貝,韓琳,劉曉慶,董雅致,張治安. 西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版). 2015(05)
[4]植物啟動子研究進展[J]. 李田,孫景寬,劉京濤. 生物技術通報. 2015(02)
[5]剛毛檉柳水通道蛋白ThPIP基因啟動子的克隆及其活性分析[J]. 王超,李昕荷,張瑞芝,韓悅,齊波,王玉成. 安徽農(nóng)業(yè)科學. 2014(24)
[6]玉米秸稈低溫降解復合菌系的篩選[J]. 薩如拉,高聚林,于曉芳,胡樹平. 中國農(nóng)業(yè)科學. 2013(19)
[7]集胞藻sbtA基因具有提高水稻旗葉葉綠素含量及株高的功能[J]. 楊浩萌,薛哲勇,趙樂,漆小泉,黃芳. 植物生理學報. 2013(04)
[8]棉花PGHNBS啟動子維管束特異表達元件的分離及功能研究[J]. 楊郁文,張保龍,陳天子,高媛媛. 江蘇農(nóng)業(yè)學報. 2012(06)
[9]雷公藤hmgr基因克隆、序列分析及誘導表達[J]. 武瑩,李威,祝傳書,王永宏,張興. 西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版). 2012(11)
[10]小麥穗發(fā)芽抗性相關Vp1基因啟動子的分離及功能驗證[J]. 孫永偉,聶麗娜,馬有志,徐兆師,夏蘭琴. 作物學報. 2011(10)
博士論文
[1]水稻組織特異表達啟動子的分離克隆、功能分析及應用[D]. 葉榮建.華中農(nóng)業(yè)大學 2012
碩士論文
[1]水稻開花基因OsMADS-BOX59與OsTFL2初步研究[D]. 韓法營.廣西大學 2015
[2]水稻種胚特異基因OsESG1及其啟動子的研究[D]. 房孝良.山東師范大學 2012
本文編號：3459268
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