草木樨（Melilotus spp.）是重要的豆科牧草,但該草屬內(nèi)的進(jìn)化、種間關(guān)系和遺傳多樣性等分子水平的研究較少。在植物生長(zhǎng)、發(fā)育和其他生物過(guò)程中,miRNA在轉(zhuǎn)錄后的基因表達(dá)中起重要的調(diào)節(jié)作用。本文首次借助草木樨高通量測(cè)序數(shù)據(jù)開(kāi)發(fā)EST-SSR分子標(biāo)記和研究該引物的通用性,并分析了草木樨屬18個(gè)種的遺傳多樣性和種群結(jié)構(gòu);此外,以香豆素含量差異的白花草木樨（M.albus）種質(zhì)為材料進(jìn)行高通量測(cè)序,鑒定miRNA以及miRNA差異表達(dá)分析。主要研究結(jié)果如下:1.利用草木樨EST序列設(shè)計(jì)得到了18182對(duì)SSR引物,根據(jù)堿基重復(fù)類型、預(yù)期片段大小和退火溫度等條件篩選出550對(duì)EST-SSR引物。在15份白花草木樨種質(zhì)中評(píng)價(jià)引物的多態(tài)性,共有114對(duì)引物表現(xiàn)出了較高的多態(tài)性,多態(tài)信息含量介于0.16⁰.92之間,平均值為0.79。進(jìn)一步研究新開(kāi)發(fā)的114對(duì)EST-SSR引物在草木樨屬18個(gè)種的通用性,發(fā)現(xiàn)共有70對(duì)引物在18個(gè)種之間表現(xiàn)出較高的多態(tài)性,其通用率為61.4%�；赨PGMA聚類分析,草木樨屬18個(gè)種可分為三個(gè)集群,集群I、II和III分別包含了10、4... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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四個(gè)EST-SSR位點(diǎn)（引物21、31、61和392）在不同白花草木樨種質(zhì)中的電泳分析

18圖 2.2 15 份白花草木樨種質(zhì)基于 114 個(gè) EST-SSR 標(biāo)記的聚類圖Figure 2.2 Dendrogram of 15 M. albus accessions based on 114 EST-SSR markers2.3.5 草木樨屬不同種 EST-SSR 引物的通用性分析以 18 個(gè)草木樨屬物種為研究對(duì)象，對(duì)新開(kāi)發(fā)的具有高多態(tài)性的 114 對(duì)白花草木樨 EST-SSR 引物進(jìn)行引物轉(zhuǎn)移性的研究。結(jié)果表明，共有 70 對(duì)白花草木樨EST-SSR 引物能夠在草木樨屬 18 個(gè)種中通用，通用率為 61.4%（附表 2），并且具有明顯的多態(tài)性。由表 2.5 可以看出，具有多態(tài)性的 70 對(duì)白花草木樨 EST-SSR引物在草木樨屬 18 個(gè)種 54 個(gè)單株中共獲得了 411 個(gè)等位基因，每對(duì) EST-SSR引物產(chǎn)生 2-11（平均值為 5.87）個(gè)等位基因。此外，這 70 個(gè)白花草木樨 EST-SSR位點(diǎn)的觀測(cè)雜合度 HO、期望雜合度 HE和多態(tài)信息含量 PIC 的范圍分別為 0~1、0.10~0.88 和 0.10~0.87，其平均值分別為 0.11、0.72 和 0.69（表 2.5）。以上結(jié)果證明基于白花草木樨 EST 序列數(shù)據(jù)開(kāi)發(fā)的 SSR 引物具有很好的通用性，可用于

蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 草木樨屬 EST-SSR 遺傳多樣性分析及 miRNA 的鑒定續(xù)表 2.6 利用 70 個(gè) EST-SSR 標(biāo)記檢測(cè)草木樨屬 18 個(gè)種的遺傳多樣性信息Continue table 2.6 Genetic diversity of 18 Melilotus species detected by 70 EST-SSR markers種Species多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)The numberofpolymorphicloci多態(tài)性位點(diǎn)百分比（%）Thepercentage ofpolymorphicloci (%)觀測(cè)等位基因數(shù)Observednumberof alleles有效等位基因數(shù)Effectivenumberof allelesNei 基因多樣性Nei's(1973)genediversityShannon 信息指數(shù)Shannon'sInformationindexM. speciosus15 3.65% 1.037 1.026 0.015 0.021M. spicatus113 27.49% 1.275 1.166 0.100 0.150M. suaveolens34 8.27% 1.083 1.058 0.033 0.048M. sulcatus1 0.24% 1.002 1.002 0.001 0.002M. tauricus40 9.73% 1.097 1.069 0.039 0.057M. wolgicus18 4.38% 1.044 1.030 0.017 0.025

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]基于cpDNA單倍型和SSR分析的銀杏群體遺傳結(jié)構(gòu)和譜系地理學(xué)研究[D]. 閆小玲.浙江大學(xué) 2010

碩士論文
[1]草木樨屬植物形態(tài)學(xué)和分子系統(tǒng)進(jìn)化研究[D]. 狄紅艷.蘭州大學(xué) 2015
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本文編號(hào)：3446812