本論文在小麥TaSAP5分離克隆的基礎(chǔ)上,完成了其在干旱脅迫下的功能鑒定及調(diào)控途徑解析。我們發(fā)現(xiàn)TaSAP5超表達顯著提高小麥和擬南芥的抗旱性,其編碼蛋白具有泛素E3連接酶功能,并能介導(dǎo)DREB2A互作蛋白DRIP （DREB2A INTERACTING PROTEIN）的降解,進而增加DREB2A蛋白的積累。取得的主要研究結(jié)果如下:1.來自A、B、D染色體組的TaSAP5部分同源基因都受干旱脅迫的誘導(dǎo)表達,超表達TaSAP5轉(zhuǎn)化擬南芥和小麥能夠顯著提高其抗旱性,且不影響正常生長條件下的生長。2.通過RNA-seq分析和RT-PCR分析發(fā)現(xiàn),超表達TaSAP5小麥和擬南芥轉(zhuǎn)基因株系在干旱脅迫后與WT相比,DREB2A下游基因顯著上調(diào)表達,而DREB2A自身的轉(zhuǎn)錄表達并無顯著差異。通過Western blot發(fā)現(xiàn)干旱脅迫后DREB2A蛋白在超表達TaSAP5轉(zhuǎn)基因株系中顯著高于對照,說明TaSAP5可能通過蛋白質(zhì)水平促進DREB2A蛋白的表達;3.在小麥原生質(zhì)體中進行亞細胞定位實驗發(fā)現(xiàn)TaSAP5定位在細胞核與細胞質(zhì),通過體外泛素化實驗驗證了 TaSAP5具有E3泛素連接酶功能;4.通過... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－?２不同類型的Ｅ３泛素連接酶（引自Ｗｅｎｄｙ?Ｊ．?Ｌｙｚｅｎｇａ?ｅｔ?ａ?Ｉ．?，?２０１１?）??

圖２－?１小麥超表達載體示意圖??２．?１．３．?２擬南芥超表達載體構(gòu)建：??１．目的基因Ｔａ＆４Ｐ５擴增所用引物：??ＴａＳＡＰ５－?ｐＥＧＡＤ?－Ｌ：?５５－?ＣＴＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＣＧＡＡＴＴＣＡＴＧＧＣＧＣＡＧＣＧＧＧＡＴＣＡＣＡ－３，??ＴａＳＡＰ５－?ｐＥＧＡＤ?－Ｒ：?５５－?ＴＡＴＣＴＡＧＡＴＣＣＧＧＴＧＧＡＴＣＣＴＣＡＧＡＡＣＣＴＧＡＣＧＡＧＣＴＴＧ－３？??２．?ＰＣＲ反應(yīng)體系：??反應(yīng)體系同２．１．４．１??３．?ＰＣＲ擴增程序：??９８°Ｃ，?５?ｍｉｎ；?９８°Ｃ?１０?ｓ，?５８°Ｃ?１５?ｓ，?７２°Ｃ?３５?ｓ，?３５?個循環(huán)；７２°Ｃ延伸?５?ｍｉｎ，?１２°Ｃ保ＰＣＲ產(chǎn)物通過重組克隆的方法連接到線性化的ｐＥＧＡＤ載體（圖２－２），獲得ｐＥＧＡＤ－ｒａ＾質(zhì)粒。??

圖２－?２擬南芥超表達載體示意圖??


本文編號：3441703