木薯塊根富含淀粉,淀粉作為主要的糧食,是熱帶地區(qū)5億人口的主糧。木薯具有極高的光合效率和庫強,但木薯塊根中碳水化合物的積累含量遠遠低于其理論產(chǎn)量。研究木薯淀粉在源庫之間的轉運效率,對于培育高產(chǎn)、高淀粉含量的木薯品種具有重要的意義。植物轉化酶是蔗糖代謝的關鍵酶,該酶調(diào)控光合產(chǎn)物從韌皮部運輸至塊根中,能夠影響淀粉在源庫的轉化率。堿性/中性轉化酶基因MeNINV1在木薯塊根淀粉積累的各時期的表達量較高,因此我們推測它是木薯塊根蔗糖分解代謝關鍵基因。對堿性/中性轉化酶MeNINV1的功能進行深入研究,將有利于我們對堿性/中性轉化酶調(diào)控木薯塊根蔗糖代謝機制的解析,為培育高產(chǎn)、高淀粉的木薯品種提供理論依據(jù),同時也能篩選高淀粉產(chǎn)量的轉基因木薯。本研究利用PCR技術,克隆得到MeNINV1的啟動子,對啟動子進行生物信息分析,并研究了不同激素對MeNINV1的表達調(diào)控,進一步在酵母轉化酶突變體中驗證其轉化酶活性并且分析MeNINV1的酶學特性,最后利用CAM35S啟動子,在木薯中過量表達MeNINV1基因,分析其亞細胞定位及對木薯堿性/中性轉化酶活性的影響。主要研究結果如下:1.根據(jù)已知的木薯堿性/中性... 

【文章來源】：海南大學海南省 211工程院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１木巧幼苗基因絕ＤＮＡ??Ｍ；?ＤＬ１５０００?ｍａｒｋｅｒ；?１：總?ＤＮＡ??

設計特異引物：Ｍｌｐ－Ｆ：?５＇－?ＴＴＴＧＴＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＡＧＴＣＣＴＡＣＣＧ－３＇和?Ｍｌｐ－Ｒ?：??５＇－ＣＣＣＡＡＴＴＡＧＧＡＴＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＧＴ－３＇。Ｗ木馨?ＤＮＡ?為模板，ＰＣＲ?擴增得到約??１８００?ｂｐ的核昔酸片段（圖２）。將擴增得到的片段與ＰＭＤ１８Ｔ載體相連，命名為：??ＭｐＭ８Ｔ，轉化至大腸桿菌感受態(tài)細胞，挑取單菌落進行菌液ＰＣＲ，鑒定陽性克隆，??然后送至上海生工測序部測序�？寺〉玫降男蛄信c木墓基因組數(shù)據(jù)庫序列和ＧｅｎＢａｎｋ??中登陸的Ｍｅ胃Ｗ基因編碼區(qū)序列進行數(shù)據(jù)比對發(fā)現(xiàn)，獲得片段的核巧酸序列長度??為１?７７７?ｂｐ，其中包含ＭｅＴＶ／ＷＦ／基因的起始密碼ＡＴＧ上游Ｉ?７１４?ｂｐ的啟動子區(qū)序列??和６３?ｂｐ的ＣＤＳ區(qū)序列。??采用啟動子生物信息學在線分析軟件ＰｌａｎｔＣＡＲＥ分析基因啟動子序列??上可能存在的順式作用元件（圖３），結果發(fā)現(xiàn)其包含ＣＡＡＴ－ｂｏｘ和ＴＡＴＡ－ｂｏｘ等真核基??因啟動子的特征序列元件，同時存在大量的光反應相關元件，例如：Ｂｏｘ?Ｉ、Ｇ－Ｂｏｘ、??ＴＣＴ－ｎｉｏｔｉｆ等，也存在熱激響應元件Ｈ化、防御壓為響應元件ＴＣ－ｒｉｃｈｒｅｐｅａｔｓ等，受??榮莉酸刺激誘導的ＴＧＡＣＧ－ｍｏｔｉｆ和ＣＧＴＣＡ－ｍｏｔｉｆ元件、受赤霉素調(diào)控的Ｐ－ｂｏｘ元件、??脫落酸應答元件ＡＢ艮Ｅ、乙席響應元件ＥＲＥ等激素相應相關元件。表２列出了各順??式作用元件的具體信息及功能。??２４??

圖４?ＧＡ３處理木巧的根ＲＮＡ??１－５；?ＣＫ，?６ｈ，１２ｈ，２４ｈ，?３６ｈＲＮＡ

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]木薯轉化酶基因家族克隆、結構進化及表達分析[D]. 姚遠.海南大學 2013

碩士論文
[1]小麥Na+/H+逆轉運蛋白TaNHX2的功能驗證及功能域分析[D]. 周揚.河南農(nóng)業(yè)大學 2011



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