木薯塊根富含淀粉,淀粉作為主要的糧食,是熱帶地區(qū)5億人口的主糧。木薯具有極高的光合效率和庫(kù)強(qiáng),但木薯塊根中碳水化合物的積累含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其理論產(chǎn)量。研究木薯淀粉在源庫(kù)之間的轉(zhuǎn)運(yùn)效率,對(duì)于培育高產(chǎn)、高淀粉含量的木薯品種具有重要的意義。植物轉(zhuǎn)化酶是蔗糖代謝的關(guān)鍵酶,該酶調(diào)控光合產(chǎn)物從韌皮部運(yùn)輸至塊根中,能夠影響淀粉在源庫(kù)的轉(zhuǎn)化率。堿性/中性轉(zhuǎn)化酶基因MeNINV1在木薯塊根淀粉積累的各時(shí)期的表達(dá)量較高,因此我們推測(cè)它是木薯塊根蔗糖分解代謝關(guān)鍵基因。對(duì)堿性/中性轉(zhuǎn)化酶MeNINV1的功能進(jìn)行深入研究,將有利于我們對(duì)堿性/中性轉(zhuǎn)化酶調(diào)控木薯塊根蔗糖代謝機(jī)制的解析,為培育高產(chǎn)、高淀粉的木薯品種提供理論依據(jù),同時(shí)也能篩選高淀粉產(chǎn)量的轉(zhuǎn)基因木薯。本研究利用PCR技術(shù),克隆得到MeNINV1的啟動(dòng)子,對(duì)啟動(dòng)子進(jìn)行生物信息分析,并研究了不同激素對(duì)MeNINV1的表達(dá)調(diào)控,進(jìn)一步在酵母轉(zhuǎn)化酶突變體中驗(yàn)證其轉(zhuǎn)化酶活性并且分析MeNINV1的酶學(xué)特性,最后利用CAM35S啟動(dòng)子,在木薯中過(guò)量表達(dá)MeNINV1基因,分析其亞細(xì)胞定位及對(duì)木薯堿性/中性轉(zhuǎn)化酶活性的影響。主要研究結(jié)果如下:1.根據(jù)已知的木薯堿性/中性... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１木巧幼苗基因絕ＤＮＡ??Ｍ；?ＤＬ１５０００?ｍａｒｋｅｒ；?１：總?ＤＮＡ??

設(shè)計(jì)特異引物：Ｍｌｐ－Ｆ：?５＇－?ＴＴＴＧＴＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＡＧＴＣＣＴＡＣＣＧ－３＇和?Ｍｌｐ－Ｒ?：??５＇－ＣＣＣＡＡＴＴＡＧＧＡＴＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＧＴ－３＇。Ｗ木馨?ＤＮＡ?為模板，ＰＣＲ?擴(kuò)增得到約??１８００?ｂｐ的核昔酸片段（圖２）。將擴(kuò)增得到的片段與ＰＭＤ１８Ｔ載體相連，命名為：??ＭｐＭ８Ｔ，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，挑取單菌落進(jìn)行菌液ＰＣＲ，鑒定陽(yáng)性克隆，??然后送至上海生工測(cè)序部測(cè)序。克隆得到的序列與木墓基因組數(shù)據(jù)庫(kù)序列和ＧｅｎＢａｎｋ??中登陸的Ｍｅ胃Ｗ基因編碼區(qū)序列進(jìn)行數(shù)據(jù)比對(duì)發(fā)現(xiàn)，獲得片段的核巧酸序列長(zhǎng)度??為１?７７７?ｂｐ，其中包含ＭｅＴＶ／ＷＦ／基因的起始密碼ＡＴＧ上游Ｉ?７１４?ｂｐ的啟動(dòng)子區(qū)序列??和６３?ｂｐ的ＣＤＳ區(qū)序列。??采用啟動(dòng)子生物信息學(xué)在線分析軟件ＰｌａｎｔＣＡＲＥ分析基因啟動(dòng)子序列??上可能存在的順式作用元件（圖３），結(jié)果發(fā)現(xiàn)其包含ＣＡＡＴ－ｂｏｘ和ＴＡＴＡ－ｂｏｘ等真核基??因啟動(dòng)子的特征序列元件，同時(shí)存在大量的光反應(yīng)相關(guān)元件，例如：Ｂｏｘ?Ｉ、Ｇ－Ｂｏｘ、??ＴＣＴ－ｎｉｏｔｉｆ等，也存在熱激響應(yīng)元件Ｈ化、防御壓為響應(yīng)元件ＴＣ－ｒｉｃｈｒｅｐｅａｔｓ等，受??榮莉酸刺激誘導(dǎo)的ＴＧＡＣＧ－ｍｏｔｉｆ和ＣＧＴＣＡ－ｍｏｔｉｆ元件、受赤霉素調(diào)控的Ｐ－ｂｏｘ元件、??脫落酸應(yīng)答元件ＡＢ艮Ｅ、乙席響應(yīng)元件ＥＲＥ等激素相應(yīng)相關(guān)元件。表２列出了各順??式作用元件的具體信息及功能。??２４??

圖４?ＧＡ３處理木巧的根ＲＮＡ??１－５；?ＣＫ，?６ｈ，１２ｈ，２４ｈ，?３６ｈＲＮＡ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]木薯轉(zhuǎn)化酶基因家族克隆、結(jié)構(gòu)進(jìn)化及表達(dá)分析[D]. 姚遠(yuǎn).海南大學(xué) 2013

碩士論文
[1]小麥Na+/H+逆轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白TaNHX2的功能驗(yàn)證及功能域分析[D]. 周揚(yáng).河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



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