轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管是生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的保障,而轉(zhuǎn)基因檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是進(jìn)行轉(zhuǎn)基因監(jiān)管檢測的物質(zhì)基礎(chǔ),缺少標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)就難以保證檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性、可靠性和可比性。轉(zhuǎn)基因玉米MIR604是我國批準(zhǔn)進(jìn)口用作加工原料的轉(zhuǎn)基因品種,對其安全監(jiān)管亟須制備標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。本項目通過對轉(zhuǎn)基因玉米MIR604種子進(jìn)行原材料鑒定、研磨、過篩、含水量測定等步驟,制備出轉(zhuǎn)基因玉米MIR604純品基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。均勻性檢驗和穩(wěn)定性檢驗結(jié)果表明,本批標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在瓶內(nèi)和瓶間均具有良好的均勻性,可在常溫下運輸1個月,長期穩(wěn)定性達(dá)到6個月,量值穩(wěn)定。本批標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性量值為轉(zhuǎn)基因DNA與總DNA的拷貝數(shù)比值,由9家實驗室采用MIR604/Adh1二重數(shù)字PCR聯(lián)合定值,量值為0.50。充分評估了標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值結(jié)果的各個不確定度分量,合成擴(kuò)展不確定度為0.06 （copy/copy）。本批標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)規(guī)格為1 g瓶–1,使用時最小取樣量為100 mg,可用于轉(zhuǎn)基因玉米MIR604的安全監(jiān)管和定量標(biāo)識、以及實驗室質(zhì)量控制等領(lǐng)域。 

【文章來源】：作物學(xué)報. 2020,46(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【部分圖文】：

鑒定轉(zhuǎn)基因種子基因型的原理示意圖

雜合種子的擴(kuò)增曲線圖

將轉(zhuǎn)基因玉米MIR604種子粉末在混勻機(jī)中混勻�；靹蜻^程中每隔3 h取樣一次,共取樣4次。每次選不同的部位取樣,取9份,每份100 mg。提取樣品的基因組DNA,采用表1中MIR604轉(zhuǎn)化體和玉米內(nèi)標(biāo)基因Adh1特異性引物探針進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增。以基因型鑒定的純品MIR604基因組DNA作為標(biāo)準(zhǔn)品,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品的轉(zhuǎn)基因含量(轉(zhuǎn)基因和內(nèi)標(biāo)基因拷貝數(shù)比值)。采用方差分析法檢驗數(shù)據(jù),檢驗結(jié)果表明,從不同位置抽取的樣品其量值均在0.45～0.55的區(qū)間內(nèi)波動,沒有明顯差異(圖3),均勻性良好,且不隨混勻時間的長短發(fā)生變化,表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。2.2.4 分裝和保存

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]轉(zhuǎn)基因作物發(fā)展及應(yīng)用概述[J]. 沈平,武玉花,梁晉剛,盧新,章秋艷,王顥潛,劉鵬程.  中國生物工程雜志. 2017(01)
[2]轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值和不確定度研究進(jìn)展[J]. 張麗,吳剛,武玉花,沈平,宋貴文,周云龍.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2014(03)



本文編號：3407102