VDAC （Voltage-dependent anion channel）是位于線粒體外膜上參與細(xì)胞質(zhì)和線粒體膜間物質(zhì)及能量交換的主要通道,在細(xì)胞程序性死亡、能量代謝、物質(zhì)運(yùn)輸以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起著重要的作用。前期實(shí)驗(yàn)室在水稻基因組中鑒定出8個(gè)OsVDAC基因。為研究OsVDAC6的功能,本研究根據(jù)水稻OsVDAC6的ORF序列設(shè)計(jì)引物,將相應(yīng)編碼區(qū)克隆至原核表達(dá)載體pET-32a （+）中,通過IPTG誘導(dǎo)Os VDAC6融合蛋白表達(dá),利用Western Blot檢測目的蛋白。構(gòu)建了pM999-OsVDAC6-GFP瞬時(shí)表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化水稻原生質(zhì)體后用激光共聚焦顯微鏡觀察熒光信號。結(jié)果表明OsVDAC6被成功克隆到pET-32a（+）和pM999-GFP載體,0.5mmoL/L IPTG 16℃誘導(dǎo)8 h可大量表達(dá)49 kD可溶性目的蛋白,并且Os VDAC6定位于線粒體。本試驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步研究OsVDAC6的功能提供了科學(xué)依據(jù)。 

【文章來源】：分子植物育種. 2020,18(13)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

pET-32a-OsVDAC6重組質(zhì)粒鑒定注:A:質(zhì)粒PCR檢測;B:Eco RⅠ酶切鑒定;M,M2:DL2000DNA Marker;M1:DL15000 DNA Marker;1～8:pET-32a-OsV-DAC6;9:pET-32a

圖1 pET-32a-OsVDAC6重組質(zhì)粒鑒定注:A:質(zhì)粒PCR檢測;B:Eco RⅠ酶切鑒定;M,M2:DL2000DNA Marker;M1:DL15000 DNA Marker;1～8:pET-32a-OsV-DAC6;9:pET-32a1.4 OsVDAC6的亞細(xì)胞定位分析

pM999-Os VDAC6-GFP轉(zhuǎn)化水稻黃化幼苗原生質(zhì)體，培養(yǎng)10 h后用線粒體染料染色30 min，制片后在激光共聚焦顯微鏡下觀察熒光分布，結(jié)果顯示，Os VDAC6定位于線粒體(圖4)。2 討論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]水稻OsVDAC2基因的克隆及亞細(xì)胞定位分析[J]. 鐘英健,王春臺,劉學(xué)群,徐鑫.  中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2015(24)



本文編號：3407086