茶樹（Camellia sinensis）的栽培在我國已經(jīng)有3000多年的歷史,茶樹種質(zhì)資源相當(dāng)豐富;不同品種的茶樹具有不同的適制性,在這其中茶葉內(nèi)含成分起了關(guān)鍵作用。與茶樹品質(zhì)形成相關(guān)的成分主要有茶多酚、氨基酸和咖啡堿,而’酚氨比’也經(jīng)常用作評價茶樹品質(zhì)的重要指標(biāo)。在茶樹的多酚和氨基酸合成途徑中,磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）扮演著重要角色,茶樹中PEP進(jìn)入葉綠體可作為兒茶素等次生代謝物的原料,而在細(xì)胞液中進(jìn)入三羧酸循環(huán)可合成茶氨酸,因此將PEP轉(zhuǎn)運進(jìn)入葉綠體的PPT轉(zhuǎn)運子功能對茶樹品質(zhì)形成具有重要作用。本研究從磷酸烯醇式丙酮酸轉(zhuǎn)運子（CsPPT2）基因的克隆入手,與課題組早期研究的基因CsPPT1進(jìn)行比較分析,結(jié)合兩個基因在不同組織、不同時期、不同葉色茶樹品種的不同時期的表達(dá)量分析2個基因與茶樹品質(zhì)形成的關(guān)系。具體研究結(jié)果如下:（1）以茶樹（Camellia sinensis）’白葉1號’為材料,應(yīng)用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆獲得茶樹磷酸烯醇式丙酮酸轉(zhuǎn)運子家族一個基因CsPPT2的cDNA序列,CsPPT2的cDNA全長1469bp,其中開放閱讀框（ORF）為1218bp,編碼40... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１茶樹基因的克隆??Ｆｉｐ?２－１?Ａｍｎｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣｓＰＰＴ２?ｐｅｎｅ?ｆｒｏｍ?Ｃ．ｏｍｅｌｌｉｎ?ｓｉｎｅｎｓｉｓ??２２??

Ｆｉｇ．２－４?Ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ?ｓｉｇｎａｌ?ｐｅｐｔｉｄｅ?ｏｆ?ＣｓＰＰＴ２??２．２．２．６茶樹基因跨膜區(qū)域結(jié)構(gòu)預(yù)測??采用ＴＭＨＭＭ分析發(fā)現(xiàn)，ＧＰＰｒ２共有６個跨膜結(jié)構(gòu)域（圖２－６），預(yù)測位置分??別在?１０５－１２２、１３２－１５４、１６７－１８９、２２７－２４９、２７９－３０１、３７２－３９４。推測該蛋白可能為跨??膜蛋白。茶樹蛋白氨基酸Ｎ端和Ｃ端均處于細(xì)胞膜內(nèi)部。與ＣｓＰ／Ｔ／不同的??是，Ｃ？斤７７有７個跨膜區(qū)域。??２．２．２．７茶樹Ｏ■尸／Ｔ２基因亞細(xì)胞定位預(yù)測??利用ＴａｒｇｅｔＰ?１．１?Ｓｅｒｖｅｒ在線軟件預(yù)測０斤７２蛋白的亞細(xì)胞定位情況如表２－２。??顯示葉綠體轉(zhuǎn)運肽定位的可能性最大，得分為０．９８６，而作為線粒體粑向肽和信號肽??定位的可能性很小，得分僅為０．０２１和０．００３。??表２－２?Ｃ＾Ｐ７２的亞細(xì)胞定位的預(yù)測??Ｔａｂｌｅ?２?Ｔｈｅ?Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣｓＰＰＴ２??Ｎａｍｅ?Ｌｅｎｇｔｈ?ｃＴＰ?ｍＴＰ?ＳＰ?Ｏｔｈｅｒ?Ｌｏｃ?ＲＣ???ＣｓＰＰＴ２?４０６＂?０．９８６?０．０２１?０．００３?０．４２?Ｃ?１?￣??２６??

９５?°Ｃ?５?ｓ?］＿?４０?個循環(huán)??６０?°Ｃ?３０?ｓ?？??６５?°Ｃ?１０?ｓ?６１個循環(huán)??利用ｉＱ？５Ｓ〇ｆｔｗａｒｅ進(jìn)行熔解曲線分析，相對表達(dá)差異為２＿＾ＣＴ，ＡＣＴ＝ＣＴ，目??的基因－ＣＴ神細(xì)［７９１。每一個樣品做三個生物學(xué)重復(fù)，利用統(tǒng)計學(xué)軟件ＳＰＳＳ?１７．０對數(shù)??據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。??３．２實驗結(jié)果與分析??３＿２．１不同茶樹品種ＣＳＰＰ７７和Ｃ？ＰＰ：Ｔ２基因的克隆??以茶樹一芽二葉ｃＤＮＡ為模板和己設(shè)計好的ＯＦＲ框的引物（表２－１）克�。茫螅校校罚�??和ＣＳＰ／Ｔ２，獲得不同品的種Ｃ＾／Ｔ／和（＾７＾７７均約１２００?ｂｐ的片段。測序并結(jié)合??ＢｉｏＸＭ?２．６分析發(fā)現(xiàn)五個品種的ＣｓＰＰＴＶ該基因完整ＯＲＦ長度為１２２７?ｂｐ，編碼４０８??個氨基酸，基因完整ＯＲＦ長度為１２１８?ｂｐ，編碼４０６個氨基酸（圖３－１）。??

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：3366698