轉(zhuǎn)Bt抗蟲棉是我國種植面積最大的轉(zhuǎn)基因作物,在我國已有20年種植歷史。外源基因表達穩(wěn)定性一直是轉(zhuǎn)基因遺傳分析和分子特征評價的重要內(nèi)容,為了深入研究轉(zhuǎn)Bt抗蟲棉外源基因表達穩(wěn)定性,本研究以保鈴棉中的MON531轉(zhuǎn)化體（MON531）、7S非功能插入（簡稱7S）,以及與MON531相同載體的MON757轉(zhuǎn)化體（MON757）為研究材料,分析了單個轉(zhuǎn)化體插入和復(fù)合轉(zhuǎn)化體插入在外源殺蟲蛋白表達、mRNA轉(zhuǎn)錄和啟動子甲基化水平上的差異,主要研究結(jié)果如下:1.以棉花基因組與插入序列的連接區(qū)為靶標,建立7S的定性、定量PCR檢測方法。利用建立的方法分析了2014年我國湖北省市售的48份轉(zhuǎn)基因棉花種子,有8份檢測到7S非功能插入,定量PCR檢測表明,其含量介于0.46%-34.39%。進一步跟蹤檢測表明,保鈴棉531中7S非功能插入與抗蟲功能性插入在遺傳上不連鎖。2.利用ELISA方法測定MON531、MON757、7S及其復(fù)合轉(zhuǎn)化體Cry1Ac蛋白表達情況。對3個市場棉種材料研究表明,7S非功能插入不影響MON531中Cry1Ac蛋白表達;對具有相同遺傳背景的純合MON531、MON757及其復(fù)合轉(zhuǎn)... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

引物、探針設(shè)計圖

.2 我國棉花種子中 7S 非功能插入的定性檢測分析運用 7S 非功能插入定性 PCR 檢測方法對 2014 年湖北省種子市場購買的鄂雜棉品種進行鑒定，結(jié)果表明湘沃棉 C35F1、湘雜棉 13 號 F1、渝雜 2 號 F1、鉬雜F1、創(chuàng)雜棉 21 號、鄂雜棉 26 號 F1 等 7 個材料檢測到 7S 非功能插入序列。隨機 S-26F1、創(chuàng)雜棉 21 號)，分別對其 60 單粒進行鑒定，兩轉(zhuǎn)基因棉花品種各檢出 7S 非功能插入的種子（圖 2-4）。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1112圖 2-3. 7S 非功能插入定性 PCRA: 100% B: 10% C:1% DE: 0.05% F: 0% M: DL2000 Figure 2-3. Sensitivity test of qualA: 100% B:10% C:1% E: 0.05% F: 0% M: DL2000 圖 2-2. 定性 PCR 特異性測定1: 棉花 2: 大豆 3: 甜菜 4: 油菜 5: 玉米 6: 水稻7: 苜蓿 8: 木瓜 9: MON531 10: 空白 11: 陽性 12:DL2000 MarkerFigure 2-2. Specificity identification of qualitative PCR1: Cotton 2: Soybean 3: Beet 4: Rape 5: Maize 6: Rice 7:Alfalfa 8: Papaya 9: MON531 10: Blank 11: Positive12: DL2000 Marker

2.2.2 我國棉花種子中 7S 非功能插入的定性檢測分析運用 7S 非功能插入定性 PCR 檢測方法對 2014 年湖北省種子市場購買的鄂雜棉 26 號 F148 個品種進行鑒定，結(jié)果表明湘沃棉 C35F1、湘雜棉 13 號 F1、渝雜 2 號 F1、鉬雜 411F1、S-26F1、創(chuàng)雜棉 21 號、鄂雜棉 26 號 F1 等 7 個材料檢測到 7S 非功能插入序列。隨機抽取兩個種(湘 S-26F1、創(chuàng)雜棉 21 號)，分別對其 60 單粒進行鑒定，兩轉(zhuǎn)基因棉花品種各檢出 1 粒和 2含有 7S 非功能插入的種子（圖 2-4）。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1112圖 2-3. 7S 非功能插入定性 PCR 靈敏度測試A: 100% B: 10% C:1% D: 0.1%E: 0.05% F: 0% M: DL2000 MarkerFigure 2-3. Sensitivity test of qualitative PCRA: 100% B:10% C:1% D:0.1%E: 0.05% F: 0% M: DL2000 Marker圖 2-2. 定性 PCR 特異性測定1: 棉花 2: 大豆 3: 甜菜 4: 油菜 5: 玉米 6: 水稻7: 苜蓿 8: 木瓜 9: MON531 10: 空白 11: 陽性 12:DL2000 MarkerFigure 2-2. Specificity identification of qualitative PCR1: Cotton 2: Soybean 3: Beet 4: Rape 5: Maize 6: Rice 7:Alfalfa 8: Papaya 9: MON531 10: Blank 11: Positive12: DL2000 Marker

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3311788