油菜是我國乃至全世界主要的一種油料作物,是食用植物油的主要來源。油菜在其生命歷程中可能遭遇如干旱和高鹽等非生物脅迫,生長受到嚴(yán)重影響,導(dǎo)致產(chǎn)量大大減少。有研究發(fā)現(xiàn)E3泛素連接酶在植物逆境脅迫響應(yīng)過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用,如一些U-box、SCF復(fù)合以及RING-finger等類型的E3泛素連接酶能參與植物干旱脅迫應(yīng)答途徑。BnTR1編碼一個(gè)具有RING-finger結(jié)構(gòu)域的E3泛素連接酶,因此本實(shí)驗(yàn)對甘藍(lán)型油菜“揚(yáng)油9號”（Y9,對照）及以其為遺傳轉(zhuǎn)化受體獲得的過表達(dá)BnTR1基因甘藍(lán)型油菜分別進(jìn)行了萌發(fā)期和苗期的干旱和鹽脅迫處理,初步鑒定了BnTR 在甘藍(lán)型油菜抗旱和耐鹽中的生物學(xué)功能,并探究其調(diào)控甘藍(lán)型油菜抗旱性和耐鹽性的分子機(jī)理。本研究的主要結(jié)果如下:（1）通過PCR對BnTR1轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)型油菜進(jìn)行陽性鑒定,并對得到的T0代陽性苗進(jìn)行qPCR檢測,結(jié)果鑒定得到8棵To代過表達(dá)BnTR1植株,過表達(dá)BnTR1的轉(zhuǎn)基因植株中BnTR1表達(dá)量是Y9中的2.8-6.7倍;之后對To代過表達(dá)植株的T1代幼苗進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到T1代過表達(dá)BnTR1甘藍(lán)型油菜植株。（2）以Y9作為對照,考察過... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１植物體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)對非生物脅迫的應(yīng)答（Ｘｕ?ｅｔａｌ．?，２０１５）??Ｆｉｇ?１．１?Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ?ｄｅｆｅｎｓｅ?ｓｙｓｔｅｍ?ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ?ｔｏ?ａｂｉｏｔｉｃ?ｓｔｒｅｓｓ?ｉｎ?ｐｌａｎｔｓ?（Ｘｕ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１５）??（６）—氧化氮（Ｎｉｔｒｉｃ?ｏｘｉｄｅ，?ＮＯ?

靶蛋白的泛素化需要ＡＴＰ提供能量，并主要涉及３種泛素化酶，即泛素激活酶??（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ?ｅｎｚｙｍｅ，?Ｅ１）、泛素結(jié)合酶（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｇ?ｅｎｚｙｍｅ，Ｅ２）以及泛素??連接酶（此如丨１１１１－１細(xì)１；丨呢６１１２＞０１＾，￡３）。泛素化的基本過程如圖１．３所不，即游離１］１３首先??在ＡＴＰ的存在下被Ｅ１泛素激活酶激活，使其末端的甘氨酸與Ｅ１的半胱氨酸殘基形成高??能硫酯鍵；然后被活化的Ｕｂ轉(zhuǎn)移到Ｅ２泛素結(jié)合酶的半胱氨酸疏基上，形成高能硫酯鍵；??之后在Ｅ３泛素連接酶的作用下，Ｕｂ蛋白共價(jià)結(jié)合到靶蛋白的賴氨酸殘基上，并形成Ｕｂ－??耙蛋白復(fù)合物；最后Ｕｂ標(biāo)記的ＩＥ蛋白被２６Ｓ的蛋白質(zhì)酶體識別并降解（Ｂａｃｈｍａｉｒ?ｅｔ?ａｌ．，２００１；??Ｄｒｅｈｅｒ?ｅｔ?ａｌ．，２００７；?Ｍｕｒａｔａ?ｅｔ?ａｌ．，２００９；?Ｖｉｅｒｓｔｒａ?ｅｔ?ａｌ．，?２００９）。在該過程中，Ｅ３?可以直接將?Ｕｂ??從Ｅ２轉(zhuǎn)移到靶蛋白上，也可以在轉(zhuǎn)移前通過形成Ｕｂ中間體來實(shí)現(xiàn)Ｕｂ到靶蛋白的轉(zhuǎn)移??（Ａｄａｍ?ｅｔａｌ．，２００９），此外，Ｅ３會招募帶有Ｕｂ的Ｅ２和靶蛋白，并通過識別特異的靶蛋白??序列來催化Ｕｂ的轉(zhuǎn)移

所用實(shí)驗(yàn)材料為“揚(yáng)油９號”（Ｙ９，江蘇里下河農(nóng)科所提供），以及以其為遺傳背景通??過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法得到的過表達(dá)甘藍(lán)型油菜。獲得轉(zhuǎn)基因植株的具體方法如周曉??燕（２０１２）論文中所述，簡單流程如圖２．１所示。??＿－圓邏１??接種?預(yù)培養(yǎng)?農(nóng)桿菌侵染??＿魯＿－畫??煉苗移栽?壯苗生根?篩選?篩選??圖２．１農(nóng)桿菌介導(dǎo)的油菜下胚軸轉(zhuǎn)化??Ｆｉｇ?２．１?Ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ－ｂａｓｅｄ＾ｇｒｏｉａｃ＾ｒｚｗｍ－ｍｅｄｉａｔｅｄ?ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｂｒａｓｓｉｃａ?ｎａｐｕｓ??２．１．２質(zhì)粒及菌種??瞬時(shí)表達(dá)所用大腸桿菌ＣＥｓ＇ｃ／ｗｒＭ／ｆｌ?ｃｏ／／）為ＤＨ５ａ菌株，農(nóng)桿菌??為ＥＨＡ１０５菌株，均為本實(shí)驗(yàn)室所保存；含基因的植物表達(dá)載體??ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１－５？ｒｉ？Ｊ由四川大學(xué)楊毅教授惠贈；含熒光標(biāo)記基因的植物表達(dá)載體??ＰＭＤＣ８３由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)油菜研宄團(tuán)隊(duì)惠贈。酵母雙雜所用大腸桿菌為ＤＨ５ａ菌株，酵母??菌（ｙｅａｓｔ）分別為Ｙ２ＨＧｏｌｄ菌株（ＢＤ）和Ｙ１８７（ＡＤ）；誘餌蛋白載體和篩選蛋白載體分別為??ｐＧＢＫＴ７和ｐＧＡＤＴ７，陽性與陰性對照質(zhì)粒分別為ｐＧＢＫＴ７－ｐ５３?＋?ｐＧＡＤＴ７－ＲｅｃＴ、??ｐＧＢＫＴ７－Ｌａｍ?＋?ｐＧＡＤＴ７－ＲｅｃＴ，均購于Ｃｌｏｎｔｅａｈ公司。載體圖譜如圖２．２所示。??１２??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物抗旱耐鹽機(jī)理的研究進(jìn)展[J]. 胡興旺,金杭霞,朱丹華.  中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2015(24)
[2]利用45Ca探究BnTR1基因?qū)τ筒薈a2+吸收的影響[J]. 宋波,楊遠(yuǎn)友,廖家莉,楊吉軍,唐軍,劉寧.  核農(nóng)學(xué)報(bào). 2015(07)
[3]干旱脅迫對植物生長及其生理的影響[J]. 周峰.  北京農(nóng)業(yè). 2014(03)
[4]酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與AtTR1相互作用的蛋白[J]. 羅勤,張亞,謝林峰,彭梅芳,趙哲,楊毅.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2013(06)
[5]油菜耐熱基因（BnTR1）轉(zhuǎn)化多年生黑麥草叢生芽的研究[J]. 袁曉燕,馬欣榮,李旭峰,楊毅.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2013(04)
[6]干旱脅迫對植物生長及其生理的影響[J]. 魯松.  江蘇林業(yè)科技. 2012(04)
[7]干旱脅迫和復(fù)水對冰草相關(guān)抗性生理指標(biāo)的影響[J]. 高悅,朱永鑄,楊志民,杜紅梅.  草地學(xué)報(bào). 2012(02)
[8]泛素連接酶E3介導(dǎo)的植物干旱脅迫反應(yīng)[J]. 寧約瑟,王國梁,謝旗.  植物學(xué)報(bào). 2011(06)
[9]HSP70可提高干旱高溫復(fù)合脅迫誘導(dǎo)的玉米葉片抗氧化防護(hù)能力[J]. 胡秀麗,李艷輝,楊海榮,劉全軍,李潮海.  作物學(xué)報(bào). 2010(04)
[10]植物對干旱脅迫的生理生態(tài)響應(yīng)及其研究進(jìn)展[J]. 趙雅靜,翁伯琦,王義祥,徐國忠.  福建稻麥科技. 2009(02)

博士論文
[1]擬南芥F-box基因AtPP2-B11調(diào)節(jié)鹽脅迫抗性的分子機(jī)理[D]. 賈鳳娟.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]水稻SINA泛素連接酶OsDIS1的功能分析和作用機(jī)制研究[D]. 寧約瑟.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011

碩士論文
[1]干旱脅迫對油菜種子萌發(fā)期及苗期生理影響及抗氧化酶基因表達(dá)分析[D]. 夏凌君.揚(yáng)州大學(xué) 2016
[2]TR1基因雙元載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化[D]. 周曉燕.揚(yáng)州大學(xué) 2012



本文編號：3261314