轉(zhuǎn)Bt基因棉花已在全世界范圍內(nèi)得到廣泛種植。有關(guān)Bt棉花生物安全性的研究,主要集中在土壤中Bt蛋白的來源和動(dòng)態(tài)變化、Bt蛋白對(duì)土壤生態(tài)系統(tǒng)的影響、Bt棉田昆蟲種群變化和環(huán)境安全等方面。對(duì)于Bt蛋白在土壤中降解、代謝、轉(zhuǎn)移以及代謝產(chǎn)物對(duì)土壤微生物和非轉(zhuǎn)基因作物的影響方面研究較少。本課題用土壤鏈霉菌所分泌的蛋白酶研究了 BtCry1Ac的代謝、鑒定了 BtCry1Ac蛋白降解的大分子片段和小分子多肽并研究了代謝產(chǎn)物在土壤中的轉(zhuǎn)移及對(duì)所轉(zhuǎn)移的作物和土壤微生物的影響。（1）合成BtCry1Ac基因,構(gòu)建到質(zhì)粒pGEX-4T-1中。該重組質(zhì)粒BtCry1Ac-pGEX-4T-1轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21（DE3）,IPTG誘導(dǎo)原核表達(dá)融合蛋白。利用谷胱甘肽瓊脂糖凝膠親和層析純化蛋白,純化的Bt蛋白用已有的Bt Cry1Ac ELISA試劑盒進(jìn)行了驗(yàn)證。（2）研究了利用免疫親和層析法（IAC）從轉(zhuǎn)Bt棉中純化Bt蛋白的方法�；罨z結(jié)合抗體蛋白率0.0262 mg/mg,是商品化凝膠結(jié)合率的40.6%。棉籽提取液中90%Bt蛋白被凝膠親和吸附,僅約1%能被洗脫,且雜質(zhì)較多。（3）用液質(zhì)聯(lián)用、Edman... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：125 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１全球轉(zhuǎn)基因作物種植面積趨勢(shì)線（１９９６－２０１５年）??巧ｇ．?１－１?Ｔｈｅ?ｔｒｅｎ姐ｉｎｅ?ｏｆ?ｇｌｏｂａｌ?ａｒｅａ?ｏｆ?ｂｉｏｔｅｃｈ?ｃｒｏｐ?（１９９６－２０１５）??２０１５年世界上有二千八個(gè)國(guó)家和地區(qū)耕種了轉(zhuǎn)基因?

９?蘇丹＊?０．?１?棉花??０?洪都拉斯?〈０．?１?玉米??１?智利?＜０．?１?玉米、大豆、油菜??２?萄萄牙?＜０．?１?玉米??３?越南?＜０．?１?玉米??４?捷克共和國(guó)?＜０．１?玉米???斯洛伐克?＜０．１?玉米??６?哥斯達(dá)黎加?〈０．１?棉花、大豆??７?孟加拉國(guó)?〈０．１?茄子??８?羅馬尼亞?＜０．?１?玉米??卻?１７９．?７十九個(gè)轉(zhuǎn)基因作物耕種超過五萬ｈａ．的國(guó)家??２０１５年，美國(guó)等國(guó)轉(zhuǎn)基因作物面積都超過了?０．１億ｈａ．，己西保持持續(xù)增長(zhǎng)的態(tài)勢(shì)，除少，阿根廷、印度和加拿大相對(duì)持平。２０１５年的世界耕種形式為今后的連續(xù)増長(zhǎng)創(chuàng)造了ｅｓ，?２０１５）。２０１５年亞非拉的農(nóng)民共種植面積為０．９７１億ｈａ．，占世界總面積的５４％，較２０比增加了?１％，發(fā)達(dá)國(guó)家總面積為０．抬６億ｈａ．，前者耕種面積從２０１２至２０１５年持續(xù)超

ＣｏＨ?＋ＣＮＢｒ?？??Ｓ邸?ｈａｒｏｅｅ?４?反??圖２－２瓊脂糖凝膠活化方法??巧ｇ．?２－２?Ｔｈｅ?ａｃｔｉｖａｔｉ畑?ｏｆ?ｓｅｐｈａｒｏｓｅ?４Ｂ??２．２．２．２?Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ?４Ｂ活化效果分析??比較本研究活化的瓊脂糖凝膠（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ?４Ｂ）與商品化的活化瓊脂糖凝膠（ＣＮＢｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ??Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ），臥判斷本研究的瓊脂糖凝膠活化方法的效果。??（１）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3243334