作物在栽培過程中會(huì)經(jīng)常受到各種病蟲害及惡劣環(huán)境的脅迫。干旱、高溫、冷害、鹽害這些逆境因素對(duì)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)構(gòu)成了極大的影響。鈣離子作為普遍存在的第二信使可以對(duì)逆境刺激做出響應(yīng)。植物體內(nèi)解碼鈣信號(hào)的蛋白分為四大類,其中最重要的是鈣依賴蛋白激酶（calcium dependent protein kinase,CPK）。CPKs是一類絲/蘇氨酸蛋白激酶,為植物和一些原生動(dòng)物所特有。越來越多的研究表明CPK在植物對(duì)于逆境脅迫和病原體免疫過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。油菜（Brassica napus）是十字花科非常重要的油料作物。關(guān)于油菜CPK的研究還很少。本研究中,通過亞細(xì)胞定位發(fā)現(xiàn)一個(gè)定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的油菜鈣依賴蛋白激酶BnaCPK2。BnaCPK2的組成型活化形式BnaCPK2VK和全長形式BnaCPK2FL在本氏煙草中瞬時(shí)過表達(dá)會(huì)引起顯著的活性氧累積,同時(shí)伴隨著一些細(xì)胞壞死生理指標(biāo)的顯著變化。其中BnaCPK2VK過表達(dá)下的相對(duì)電導(dǎo)率、丙二醛和花青苷含量出現(xiàn)了顯著地上升。同時(shí),BnaCPK2VK和BnaCPK2FL在本氏煙草中過表達(dá)還引起基因組DNA的斷裂。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR,我們還發(fā)現(xiàn)Bn... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 前言
    1.2 鈣信號(hào)與逆境
    1.3 鈣依賴蛋白激酶
    1.4 CPK的結(jié)構(gòu)特征
    1.5 CPK的特性
        1.5.1 鈣信號(hào)的特征與CPK對(duì)鈣離子親和能力的多樣性
        1.5.2 CPK具有亞細(xì)胞定位的特異性
        1.5.3 CPK催化底物的特異性
        1.5.4 CPK調(diào)節(jié)方式的多樣性
    1.6 CPK參與ABA誘導(dǎo)下的氣孔關(guān)閉
    1.7 CPK參與對(duì)鹽害和冷害的響應(yīng)
    1.8 CPK調(diào)控RBOH介導(dǎo)ROS的積累
    1.9 CPK參與對(duì)植物激素的響應(yīng)
    1.10 CPK調(diào)控植物的生長和發(fā)育過程
    1.11 CPK參與植物營養(yǎng)元素代謝
    1.12 CPK參與調(diào)控植物抗病與抗蟲害過程
    1.13 本研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 工程菌株與載體及培養(yǎng)基
        2.1.3 試驗(yàn)試劑及試劑盒
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 亞細(xì)胞定位及BiFC驗(yàn)證蛋白間相互作用
        2.2.2 瞬時(shí)表達(dá)載體的構(gòu)建與煙草葉片的注射
        2.2.3 DAB染色檢測過氧化氫的積累
        2.2.4 NBT染色檢驗(yàn)超氧陰離子的產(chǎn)生
        2.2.5 相對(duì)電導(dǎo)率的測定
        2.2.6 葉綠素含量測定
        2.2.7 丙二醛含量測定
        2.2.8 花青苷含量測定
        2.2.9 過氧化氫含量測定
        2.2.10 TUNEL法檢測核內(nèi)DNA斷裂情況
        2.2.11 qRT-PCR檢測ROS相關(guān)標(biāo)志基因的表達(dá)水平
        2.2.12 植物總蛋白的提取
        2.2.13 分裂泛素酵母雙雜交
第三章 BnaCPK2參與BnaRBOH介導(dǎo)的ROS積累
    3.1 BnaCPK2的亞細(xì)胞定位分析
    3.2 BnaCPK2在煙草中瞬時(shí)表達(dá)引起H2O2積累
    3.3 BnaCPK2在煙草中瞬時(shí)表達(dá)引起超氧陰離子的產(chǎn)生
    3.4 BnaCPK2在煙草中瞬時(shí)表達(dá)引起基因組DNA的斷裂
    3.5 BnaCPK2在煙草中瞬時(shí)表達(dá)引起ROS代謝及抗病等相關(guān)標(biāo)志基因的表達(dá)變化
    3.6 BiFC檢測BnaCPK2與RBOHs互作
    3.7 mbSUS檢測BnaCPK2與RBOHs互作
第四章 結(jié)果與討論
    4.1 BnaCPK2是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位的膜蛋白
    4.2 BnaCPK2參與ROS的產(chǎn)生累積和細(xì)胞壞死
    4.3 BnaCPK2與下游RBOH互作
參考文獻(xiàn)
縮略表
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]我國油菜產(chǎn)業(yè)發(fā)展的歷史回顧與展望[J]. 王漢中.  中國油料作物學(xué)報(bào). 2010(02)



本文編號(hào)：3188299